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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

[求助] 大牛来指点下啊~CDS区到底含不含内含子?看了相关的帖反而把我搞糊涂了

各位大侠,我要崩溃了,不是说我没之前没看过帖,而是看了帖之后把我搞混了。
      1 CDS区到时含不含内含子?有一个老师说不含,一个说含,我看了论坛,两种说法我都好像看过。我认为是不含的。
      2 如果CDS区不含内含子,有些基因在NCBI里查到的,标题上注明是全长CDS区,但下面的注释里却显示含有很多个CDS区,基因序列也显示含有多个CDS区,如图1,难道CDS区真含有内含子才是正解?但为什么我克隆了一个基因,反转录得到的,不含内含子了,获得的基因就跟图1情况一样,终止密码子还更多,导致多个CDS区存在,怎么会这样呢?如图2
      3 若在一个基因序列里,含有多个CDS区(就是在多个不同位置含终止密码子),连接到表达载体是不是指翻译其识别的第一个CDS?
大牛来指点下啊~CDS区到底含不含内含子?看了相关的帖反而把我搞糊涂了
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大牛来指点下啊~CDS区到底含不含内含子?看了相关的帖反而把我搞糊涂了-1
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思路决定出路。。。
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
42楼: Originally posted by 547star at 2013-06-26 16:22:47
不知道实验目的是什么。如果是克隆基因,直接拿基因组DNA分别PCR两个外显子区再做重叠PCR(要求扩增外显子的中间那2条引物有比较长的重叠区)。
上游用特异性引物,下游用Oligo(dT)来做RT-PCR,既保证特异性,也保 ...

说的很有道理!很受用!
我是想做基因克隆的,因为经验不足吧,当时没想到用基因组DNA分别PCR两个外显子区再做重叠PCR的方法来做。本想克隆到一个关键酶基因后就做表达的,只是分析到后面,才发现不对劲,才知道自己扩的是基因组DNA。
实验条件确实不太好,从植物心材里提取的RNA质量没有很好,OD比值在1.75时也用了。
现在是打算换思路来做了,但也还是想把之前的做出来,想知道问题的症结到底在哪。
谢谢~
思路决定出路。。。
43楼2013-06-26 18:25:27
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laoshi0633

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
lmcyjxs: 金币+1, 有帮助, 谢谢! 2013-06-14 17:10:09
您难道不知道特殊位置的TGA可以编码硒代半胱氨酸,Selenocysteine,
国内外很多人在研究这一课题
学习是一种信仰
2楼2013-06-14 16:27:25
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laoshi0633

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


lmcyjxs: 金币+1, 有帮助, 期待这位大牛继续多多指点,新手表示好好学习,天天向上~ 2013-06-14 17:11:26
1,你的认为是错误的。
2,基础知识有待积累
3,答案是可定的终止,除非你做特殊处理
学习是一种信仰
3楼2013-06-14 16:31:36
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by laoshi0633 at 2013-06-14 16:27:25
您难道不知道特殊位置的TGA可以编码硒代半胱氨酸,Selenocysteine,
国内外很多人在研究这一课题

弱弱地惭愧地表示真不知道~会好好补充这一知识,谢谢。
思路决定出路。。。
4楼2013-06-14 17:07:52
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