24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lmcyjxs

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 17 (小学生)
金币: 1088.2
散金: 119
红花: 7
帖子: 954
在线: 124.3小时
虫号: 1255578
注册: 2011-04-05
性别: MM
专业: 中药资源

[求助] 大牛来指点下啊~CDS区到底含不含内含子？看了相关的帖反而把我搞糊涂了

各位大侠，我要崩溃了，不是说我没之前没看过帖，而是看了帖之后把我搞混了。
   1 CDS区到时含不含内含子？有一个老师说不含，一个说含，我看了论坛，两种说法我都好像看过。我认为是不含的。
   2 如果CDS区不含内含子，有些基因在NCBI里查到的，标题上注明是全长CDS区，但下面的注释里却显示含有很多个CDS区，基因序列也显示含有多个CDS区，如图1，难道CDS区真含有内含子才是正解？但为什么我克隆了一个基因，反转录得到的，不含内含子了，获得的基因就跟图1情况一样，终止密码子还更多，导致多个CDS区存在，怎么会这样呢？如图2
   3 若在一个基因序列里，含有多个CDS区（就是在多个不同位置含终止密码子），连接到表达载体是不是指翻译其识别的第一个CDS？

1.jpg

2.jpg

回复此楼

» 猜你喜欢

思路决定出路。。。

1楼 2013-06-14 16:15:35

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

547star

木虫 (著名写手)

MolEPI: 4
应助: 184 (高中生)
金币: 4273
散金: 271
红花: 14
帖子: 1308
在线: 986.6小时
虫号: 67494
注册: 2005-05-07
专业: 系统生物学

不知道实验目的是什么。如果是克隆基因，直接拿基因组DNA分别PCR两个外显子区再做重叠PCR（要求扩增外显子的中间那2条引物有比较长的重叠区）。
上游用特异性引物，下游用Oligo(dT)来做RT-PCR，既保证特异性，也保证是从mRNA扩增的；双特异性引物和随机引物，都有可能从基因组DNA扩增。另外mRNA丰度不高或提取质量不高，目的mRNA很少，甚至没有，用的又是特异性引物和随机引物，就可能扩增到基因组DNA，解决的办法是选择目的蛋白表达含量高/意味着目的基因mRNA相对比较多的组织来提取，提取过程也要注意避免mRNA降解。发这么多帖子，就没一个RNA提取的图，也没说明实验意图，也不说明从哪里提取，那是想先弄明白问题再做课题了，那就继续吧；如果只是表达，不一定要做RT-PCR，特别是实验室条件不适合做RNA，做RT-PCR时，直接用高保真酶先分段扩增再做重叠PCR就好了，特别是只有2个片段。
纠结于前面的这些问题，往往会耽误实验的，暂时放下，以后有机会等去到条件好的实验室，也会做出漂亮的实验结果来，不是所有的意外失败会通向新的科学领域，该坚持的时候坚持，该换路线的时候就转过来。