| 查看: 1849 | 回复: 6 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
请问哪位可以帮帮我，看看问题出在哪里？
|
||
|
最近我在用pcDNA3.1-EGFP载体与一个1.8k左右的片段连接，但连接了一个月了，还是没有连上，想请教一下大家问题出在哪里？ 首先，我讲一下我的实验流程： 1、设计引物扩增出该基因引物， 2、提取RNA，反转录成cDNA，PCR扩增目的片段 3、将目的片段胶回收后连入T载体，检验正确后测序 4、测序正确后，用EcoR I和Hind III 双酶切连接了目的条带的T载体，同时也双酶切了pcDNA3.1-EGFP载体， 5、胶回收了酶切后的1.8k片段和pcDNA3.1-EGFP切开后的片段 6、T4连接酶过夜连接 7、转化、涂板后挑单克隆 8、菌落pcr鉴定，质粒提取鉴定 9、测序鉴定 接下来，我讲一下遇到的问题，在第8步的验证都非常正确，而测序的时候却总是不对，测序的结果显示是一堆大肠杆菌的基因组，我不知道问题出在什么地方，请各位高手指导一下。上传一下第八步的验证图供参考。另外，为什么pcDNA3.1-EGFP与目的片段连接效率怎么这么低呢？我挑了124个单克隆，只出来一个。  L12酶切和质粒酶切.jpg  PC3.1、L12酶切图.jpg  菌落PCR.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
0703化学调剂
已经有7人回复
-
0854，计算机类招收调剂
已经有6人回复
-
【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475
已经有6人回复
-
0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287
已经有4人回复
-
能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名
已经有8人回复
-
0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章
已经有3人回复
-
281求调剂（0805）
已经有11人回复
-
299求调剂
已经有5人回复
-
收复试调剂生
已经有3人回复
-
280求调剂
已经有7人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请教一个有关CV曲线的问题，希望师兄师姐们能进来看看，帮帮我，谢谢大家
已经有5人回复
- 哪位大侠帮我看看，ansys求解时自动退出
已经有6人回复
- 大家来帮帮忙看看我的一堆问题
已经有5人回复
- 求教！哪位大神帮我看看狄拉克方程里的一个问题啊！！
已经有11人回复
- 大家来帮帮我，看看怎么处理呀
已经有21人回复
- 大家爱帮我看看这段MATLAB程序为啥出错了
已经有5人回复
- 英文文章里图片的分辨率问题，很急啊，大家帮帮我吧！
已经有5人回复
- 一个gjf文件，总是pending,各位帮我看看是什么问题？
已经有16人回复
- PCR好多次了，一直没结果，麻烦各位帮我看看是哪出问题了？
已经有15人回复
- 使用diamond软件出现的一个小问题，知道得哥哥姐姐们帮帮忙看看哈
已经有12人回复
- 大家帮我看一个fortran的程序，我总是计算不出正确的结果
已经有20人回复
- 麻烦塔菲尔曲线高手帮我看看这几个图，说明什么问题，或者能从中得出什么信息？
已经有12人回复
- 刚刚和老外视频，简直就是运气啊，大家来帮我看看我的offer模板有什么问题么？
已经有10人回复
- 帮帮忙看看我的难题
已经有15人回复
- 【问题求助】说说我的心里状态，大家帮我看看是不是该去看心理医生了？
已经有28人回复
- 大家帮我看看这个图是怎么画出来的
已经有12人回复
- 【求助】水热法制备磷酸铁锂，大家帮我看看 问题出在哪
已经有35人回复
- 【求助】牛人们，帮帮我，回答几道小问题！！！请快点！！
已经有5人回复
- 求助 SPSS保存的问题，哪位师傅帮帮忙
已经有1人回复
4楼2013-06-13 08:43:17
2楼2013-06-12 23:32:43
3楼2013-06-13 07:52:20
5楼2013-07-03 16:14:34
5