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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 总是提不出来细菌基因组DNA
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werty1245

新虫 (初入文坛)

[求助] 总是提不出来细菌基因组DNA 已有1人参与

最近一直手提屎肠球菌的基因组DNA，开始用的是6μl 50mg/ml溶菌酶，37℃3h；10%SDS和蛋白酶K，55℃2h；5M NaCl；酚氯仿异戊醇抽提两次；2倍体积无水乙醇洗脱；75%酒精洗涤，离心，烘干。一直提不出来，后来又用CTAB/NaCl法，也没提出来，谁提出来过，教教我~~~
小妹不胜感激~~~
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1楼 2013-06-09 10:16:09
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迷迭的微笑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有可能是因为蛋白酶k和溶菌酶不是现用现配的，失效了。另外就是在抽提过程中没有注意那个蛋白，加入乙醇后蛋白会在里面悬浮；而且加入乙醇后放冰箱-20度冻2小时以上再离心比较好
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12楼2015-03-14 16:54:55
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提完以后测浓度了吗，或者跑过电泳吗？
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2楼2013-06-09 10:35:35
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werty1245

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-06-09 10:35:35
提完以后测浓度了吗，或者跑过电泳吗？

跑过电泳，很干净，什么都没有
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3楼2013-06-09 11:09:12
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
werty1245(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-06-10 16:56:22
我都是用试剂盒提的，一般不会有问题，有时候DNA浓度有点低。我看过别人的帖子，手提提不出来。也有可能你的浓度太低，用nanodrop测一下
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4楼2013-06-09 12:16:38
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