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werty1245

新虫 (初入文坛)

[求助] 总是提不出来细菌基因组DNA已有1人参与

最近一直手提屎肠球菌的基因组DNA,开始用的是6μl 50mg/ml溶菌酶,37℃3h;10%SDS和蛋白酶K,55℃2h;5M NaCl;酚氯仿异戊醇抽提两次;2倍体积无水乙醇洗脱;75%酒精洗涤,离心,烘干。一直提不出来,后来又用CTAB/NaCl法,也没提出来,谁提出来过,教教我~~~
小妹不胜感激~~~
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迷迭的微笑

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

有可能是因为蛋白酶k和溶菌酶不是现用现配的,失效了。另外就是在抽提过程中没有注意那个蛋白,加入乙醇后蛋白会在里面悬浮;而且加入乙醇后放冰箱-20度冻2小时以上再离心比较好
12楼2015-03-14 16:54:55
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
提完以后测浓度了吗,或者跑过电泳吗?
2楼2013-06-09 10:35:35
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werty1245

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 夏天的普洱茶 at 2013-06-09 10:35:35
提完以后测浓度了吗,或者跑过电泳吗?

跑过电泳,很干净,什么都没有
3楼2013-06-09 11:09:12
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夏天的普洱茶

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
werty1245(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流经验! 2013-06-10 16:56:22
我都是用试剂盒提的,一般不会有问题,有时候DNA浓度有点低。我看过别人的帖子,手提提不出来。也有可能你的浓度太低,用nanodrop测一下
4楼2013-06-09 12:16:38
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