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xingxingkids金虫 (著名写手)
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[求助]
关于合成的引物DNA序列在260nm处没有吸收峰，是怎么回事？？
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| 合成的引物，经过离心溶解后，进行紫外测试，结果在260nm处竟然没有吸收峰，请问可能是什么原因，谢谢！！ |
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【答案】应助回帖
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xingxingkids: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢您的耐心解答。我会按照您的说法再去试一下，谢谢！！ 2013-06-09 12:23:48
xingxingkids: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢您的耐心解答。我会按照您的说法再去试一下，谢谢！！ 2013-06-09 12:23:48
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我查了一下具体的用紫外光测定DNA的实验流程，楼主的离心机转速也太猛了。如果待测核酸中含有酸溶性的核苷酸或聚合的多核苷酸，则需要用钼酸铵-过氯酸沉淀剂（钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)沉淀离心后取上清液测定紫外260nm吸收峰。钼酸铵-过氯酸沉淀剂（钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)制备方法:取3.6mL70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL蒸馏水。 具体去除酸溶性的核苷酸或聚合的多核苷酸的实验流程是：0.5mL 样品DNA溶液和0.5mL蒸馏水，放入离心管A；0.5mL 样品DNA溶液和0.5mL蒸馏水，放入离心管B，钼酸铵-过氯酸沉淀剂摇匀，冰浴30分钟，以3000转/分离心10分钟。然后分别从离心管A和离心管B中分别吸取0.4mL上清液到50mL容量瓶内，定容到刻度。于紫外光光度计测定260nm处吸收峰。 你的实验因为不需要测定DNA样品的具体浓度，所以可以直接用蒸馏水作对照。但是你的离心机的转速也未免太太大了。 另外说一下DNA溶液的浓度：每mL含有核酸（单链DNA，双链DNA，RNA均可）5-50微克即可测定260nm和280nm的吸收峰，双链DNA的每个碱基对的平均分子量是618. |
7楼2013-06-08 23:21:36
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2楼2013-06-08 17:30:19
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【答案】应助回帖
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xingxingkids: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-08 18:03:31
xingxingkids(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-09 09:34:27
xingxingkids: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-08 18:03:31
xingxingkids(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-09 09:34:27
| 是不是你的样品浓度太大了，这时紫外光谱可能测不来。如果你的样品中可能混有其他的大分子DNA则要用钼酸铵-过氯酸沉淀剂（钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)沉淀离心后取上清液测定紫外260nm吸收峰。钼酸铵-过氯酸沉淀剂（钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)制备方法:取3.6mL70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL蒸馏水。 |
3楼2013-06-08 17:45:14
xingxingkids
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4楼2013-06-08 17:55:32
