| 查看: 3509 | 回复: 10 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
xingxingkids金虫 (著名写手)
|
[求助]
关于合成的引物DNA序列在260nm处没有吸收峰，是怎么回事？？
|
||||
| 合成的引物，经过离心溶解后，进行紫外测试，结果在260nm处竟然没有吸收峰，请问可能是什么原因，谢谢！！ |
回复此楼» 猜你喜欢
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有222人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有1人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 合成一段DNA的问题？引物，PCR
已经有13人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
xingxingkids: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢您的耐心解答。我会按照您的说法再去试一下，谢谢！！ 2013-06-09 12:23:48
xingxingkids: 金币+5, ★★★很有帮助, 非常感谢您的耐心解答。我会按照您的说法再去试一下，谢谢！！ 2013-06-09 12:23:48
|
我查了一下具体的用紫外光测定DNA的实验流程，楼主的离心机转速也太猛了。如果待测核酸中含有酸溶性的核苷酸或聚合的多核苷酸，则需要用钼酸铵-过氯酸沉淀剂（钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)沉淀离心后取上清液测定紫外260nm吸收峰。钼酸铵-过氯酸沉淀剂（钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)制备方法:取3.6mL70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL蒸馏水。 具体去除酸溶性的核苷酸或聚合的多核苷酸的实验流程是：0.5mL 样品DNA溶液和0.5mL蒸馏水，放入离心管A；0.5mL 样品DNA溶液和0.5mL蒸馏水，放入离心管B，钼酸铵-过氯酸沉淀剂摇匀，冰浴30分钟，以3000转/分离心10分钟。然后分别从离心管A和离心管B中分别吸取0.4mL上清液到50mL容量瓶内，定容到刻度。于紫外光光度计测定260nm处吸收峰。 你的实验因为不需要测定DNA样品的具体浓度，所以可以直接用蒸馏水作对照。但是你的离心机的转速也未免太太大了。 另外说一下DNA溶液的浓度：每mL含有核酸（单链DNA，双链DNA，RNA均可）5-50微克即可测定260nm和280nm的吸收峰，双链DNA的每个碱基对的平均分子量是618. |
7楼2013-06-08 23:21:36
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
2楼2013-06-08 17:30:19
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - MolEPI: 44
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2118.9
- 散金: 10
- 红花: 208
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★
xingxingkids: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-08 18:03:31
xingxingkids(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-09 09:34:27
xingxingkids: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-06-08 18:03:31
xingxingkids(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-09 09:34:27
| 是不是你的样品浓度太大了，这时紫外光谱可能测不来。如果你的样品中可能混有其他的大分子DNA则要用钼酸铵-过氯酸沉淀剂（钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)沉淀离心后取上清液测定紫外260nm吸收峰。钼酸铵-过氯酸沉淀剂（钼酸铵0.25%,过氯酸2.5%)制备方法:取3.6mL70%过氯酸和0.25g钼酸铵溶于96.4mL蒸馏水。 |
3楼2013-06-08 17:45:14
xingxingkids
金虫 (著名写手)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1371.8
- 散金: 264
- 红花: 5
- 帖子: 1212
- 在线: 189小时
- 虫号: 1855226
- 注册: 2012-06-11
- 性别: MM
- 专业: 电化学分析
4楼2013-06-08 17:55:32
