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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达分子量问题
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

[求助] 原核表达分子量问题

好容易构建了质粒（组氨酸标签），测序正确，而且分析表达蛋白分子量应该在27KD，可是跑SDS时在25KD，35KD都有表达，纯化完后在35KD处有明显的单条带，为什么呢？测序结果如下，求各位大神帮忙分析下~~跪谢
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    • 2013-06-08 17:17:43, 103.85 K

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1楼 2013-06-08 17:18:49
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by yangjingjing at 2013-06-10 11:22:47
未纯化的蛋白浓度太低了，不能转膜敷抗体吧？...

不会，western的灵敏度比较高，ng级别的蛋白就足以检测到。
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10楼2013-06-11 05:55:25
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你用的什么表达载体？除了his-tag外还带不带其它标签？
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2楼2013-06-09 00:37:54
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-06-09 09:20:18
大一点还是有可能的，很多文献，也出现过这种情况，他们的解释是由于标签的加入
你最好说明你的载体，片段大小，page图片
不然这样也没法看
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3楼2013-06-09 01:50:06
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ynkuaile

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yangjingjing(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-06-10 16:58:29
大一点是有可能的，我曾经做过一个蛋白，计算分子量28KD，PAGE胶分子量35KD。质谱显示是正确的。不过你还是确认一下你的终止密码子是在哪儿终止的，没问题的话这样也是有可能的。
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4楼2013-06-09 16:54:20
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