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夏沐浅

新虫 (小有名气)
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10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-17 09:58:36
这个胶也有一定问题，条带从上而下有些变宽。我不知道你的marker是哪个公司的，怎么做的预处理。我是把处理好的marker稀释到与样品同样体积的loading buffer里。跑出来的带是上下一样宽。...

marker都是直接混在上样缓冲液里面，然后就跑电泳的，需要怎么预处理吗？
还有如果没有浓缩胶的话，这种情况跑出来会不会影响很大？
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清浅
11楼2013-06-18 15:43:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-06-25 11:28:04
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11楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-18 15:43:53
marker都是直接混在上样缓冲液里面，然后就跑电泳的，需要怎么预处理吗？
还有如果没有浓缩胶的话，这种情况跑出来会不会影响很大？...

marker怎样处理要看你买是是什么产品。有些marker可以直接跑电泳，有些需要自己做变性处理。有浓缩胶的话条带应该更漂亮。但如果上样量不大的话没有浓缩胶也是可以的。
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12楼2013-06-19 00:50:38
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夏沐浅

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-19 00:50:38
marker怎样处理要看你买是是什么产品。有些marker可以直接跑电泳，有些需要自己做变性处理。有浓缩胶的话条带应该更漂亮。但如果上样量不大的话没有浓缩胶也是可以的。...

marker是伯乐的
但是这主要还是胶的问题，同样的上样，同样的蛋白，结果不一样的话，只能是胶了，因为要非常好的条带，不知道制胶的过程有什么细节，或者处理下可以更好的。
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清浅
13楼2013-06-19 10:06:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★
137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2013-06-26 18:29:28
引用回帖:
13楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-19 10:06:28
marker是伯乐的
但是这主要还是胶的问题，同样的上样，同样的蛋白，结果不一样的话，只能是胶了，因为要非常好的条带，不知道制胶的过程有什么细节，或者处理下可以更好的。...

想要重复性好主要是制胶的配方和过程尽量保持一致。胶凝的速度过快或者过慢都可能影响胶的质量和均一程度。
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14楼2013-06-19 11:29:52
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夏沐浅

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-19 11:29:52
想要重复性好主要是制胶的配方和过程尽量保持一致。胶凝的速度过快或者过慢都可能影响胶的质量和均一程度。...

太慢也有影响？我之前有时候放过一晚上
你们一般C%都是多少？
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清浅
15楼2013-06-21 19:52:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-06-25 11:28:18
引用回帖:
15楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-21 19:52:01
太慢也有影响？我之前有时候放过一晚上
你们一般C%都是多少？...

胶凝得慢当然问题不是很大，不过一般都不超过2小时。凝胶的快慢会受到环境温度和APS的影响，有时候需要根据实际情况稍微调整一下APS的用量。如果凝得时间不同，可能胶的质量会有些差别。我跑SDS-PAGE的丙烯酰胺溶液的C%是2.67%的。
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16楼2013-06-21 23:42:18
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-06-25 10:12:59
真心感觉是胶的问题啊，我们最近也跑了一次，浓缩胶就有问题（放置了好几天，有时也在室温），根本没办法浓缩成一个条带，到了分离胶那，也是上面挺均匀，下面就歪七扭八的了， 还是保存好胶吧，灌胶的操作也挺重要的，多做几次应该差不多了。
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17楼2013-06-23 19:08:14
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夏沐浅

新虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-21 23:42:18
胶凝得慢当然问题不是很大，不过一般都不超过2小时。凝胶的快慢会受到环境温度和APS的影响，有时候需要根据实际情况稍微调整一下APS的用量。如果凝得时间不同，可能胶的质量会有些差别。我跑SDS-PAGE的丙烯酰胺溶液 ...

我的凝胶速度蛮快的，就是有时候放的时间较长，这个影响大吗？
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清浅
18楼2013-06-25 09:50:58
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夏沐浅

新虫 (小有名气)
引用回帖:
17楼: Originally posted by rv1nm2y at 2013-06-23 19:08:14
真心感觉是胶的问题啊，我们最近也跑了一次，浓缩胶就有问题（放置了好几天，有时也在室温），根本没办法浓缩成一个条带，到了分离胶那，也是上面挺均匀，下面就歪七扭八的了， 还是保存好胶吧，灌胶的操作也挺重要 ...

我做了好多次了···
我也觉得是胶的问题，就是还没找到问题出在那儿
凝好的胶你们都怎么保存的？灌胶不是只要没气泡就可以了么？还有什么特别的要求？
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清浅
19楼2013-06-25 09:53:23
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)
★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流，共同进步~~ 2013-06-25 11:28:33
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19楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-25 09:53:23
我做了好多次了···
我也觉得是胶的问题，就是还没找到问题出在那儿
凝好的胶你们都怎么保存的？灌胶不是只要没气泡就可以了么？还有什么特别的要求？...

我们今天又做了一次，昨天就配好了，也凝了，放在冰箱冻了一晚上，结果今天做的结果真是惨不忍睹，现在正在染色，不知道效果会不会惨不忍睹。。

条带在浓缩胶那是以一条线的，结果到了分离胶就有点斜了，还有一组是在分离胶里面以成团的形式。万念俱灰啊！！！

其实凝好的胶当时就用是最好的，要不然就放在冰箱里，否则基本就废了把。。最好当时凝当时就用。
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20楼2013-06-25 11:25:35
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