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夏沐浅

新虫 (小有名气)

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10楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-17 09:58:36
这个胶也有一定问题,条带从上而下有些变宽。我不知道你的marker是哪个公司的,怎么做的预处理。我是把处理好的marker稀释到与样品同样体积的loading buffer里。跑出来的带是上下一样宽。...

marker都是直接混在上样缓冲液里面,然后就跑电泳的,需要怎么预处理吗?
还有如果没有浓缩胶的话,这种情况跑出来会不会影响很大?
清浅
11楼2013-06-18 15:43:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-06-25 11:28:04
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11楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-18 15:43:53
marker都是直接混在上样缓冲液里面,然后就跑电泳的,需要怎么预处理吗?
还有如果没有浓缩胶的话,这种情况跑出来会不会影响很大?...

marker怎样处理要看你买是是什么产品。有些marker可以直接跑电泳,有些需要自己做变性处理。有浓缩胶的话条带应该更漂亮。但如果上样量不大的话没有浓缩胶也是可以的。
12楼2013-06-19 00:50:38
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夏沐浅

新虫 (小有名气)

引用回帖:
12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-19 00:50:38
marker怎样处理要看你买是是什么产品。有些marker可以直接跑电泳,有些需要自己做变性处理。有浓缩胶的话条带应该更漂亮。但如果上样量不大的话没有浓缩胶也是可以的。...

marker是伯乐的
但是这主要还是胶的问题,同样的上样,同样的蛋白,结果不一样的话,只能是胶了,因为要非常好的条带,不知道制胶的过程有什么细节,或者处理下可以更好的。
清浅
13楼2013-06-19 10:06:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


137167741: 金币+1, 鼓励交流~~ 2013-06-26 18:29:28
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13楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-19 10:06:28
marker是伯乐的
但是这主要还是胶的问题,同样的上样,同样的蛋白,结果不一样的话,只能是胶了,因为要非常好的条带,不知道制胶的过程有什么细节,或者处理下可以更好的。...

想要重复性好主要是制胶的配方和过程尽量保持一致。胶凝的速度过快或者过慢都可能影响胶的质量和均一程度。
14楼2013-06-19 11:29:52
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夏沐浅

新虫 (小有名气)

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14楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-19 11:29:52
想要重复性好主要是制胶的配方和过程尽量保持一致。胶凝的速度过快或者过慢都可能影响胶的质量和均一程度。...

太慢也有影响?我之前有时候放过一晚上
你们一般C%都是多少?
清浅
15楼2013-06-21 19:52:01
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-06-25 11:28:18
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15楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-21 19:52:01
太慢也有影响?我之前有时候放过一晚上
你们一般C%都是多少?...

胶凝得慢当然问题不是很大,不过一般都不超过2小时。凝胶的快慢会受到环境温度和APS的影响,有时候需要根据实际情况稍微调整一下APS的用量。如果凝得时间不同,可能胶的质量会有些差别。我跑SDS-PAGE的丙烯酰胺溶液的C%是2.67%的。
16楼2013-06-21 23:42:18
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)

★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-06-25 10:12:59
真心感觉是胶的问题啊,我们最近也跑了一次,浓缩胶就有问题(放置了好几天,有时也在室温),根本没办法浓缩成一个条带,到了分离胶那,也是上面挺均匀,下面就歪七扭八的了, 还是保存好胶吧,灌胶的操作也挺重要的,多做几次应该差不多了。
17楼2013-06-23 19:08:14
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夏沐浅

新虫 (小有名气)

引用回帖:
16楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-06-21 23:42:18
胶凝得慢当然问题不是很大,不过一般都不超过2小时。凝胶的快慢会受到环境温度和APS的影响,有时候需要根据实际情况稍微调整一下APS的用量。如果凝得时间不同,可能胶的质量会有些差别。我跑SDS-PAGE的丙烯酰胺溶液 ...

我的凝胶速度蛮快的,就是有时候放的时间较长,这个影响大吗?
清浅
18楼2013-06-25 09:50:58
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夏沐浅

新虫 (小有名气)

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17楼: Originally posted by rv1nm2y at 2013-06-23 19:08:14
真心感觉是胶的问题啊,我们最近也跑了一次,浓缩胶就有问题(放置了好几天,有时也在室温),根本没办法浓缩成一个条带,到了分离胶那,也是上面挺均匀,下面就歪七扭八的了, 还是保存好胶吧,灌胶的操作也挺重要 ...

我做了好多次了···
我也觉得是胶的问题,就是还没找到问题出在那儿
凝好的胶你们都怎么保存的?灌胶不是只要没气泡就可以了么?还有什么特别的要求?
清浅
19楼2013-06-25 09:53:23
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rv1nm2y

银虫 (小有名气)

★ ★
137167741: 金币+2, 小木虫交流,共同进步~~ 2013-06-25 11:28:33
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19楼: Originally posted by 夏沐浅 at 2013-06-25 09:53:23
我做了好多次了···
我也觉得是胶的问题,就是还没找到问题出在那儿
凝好的胶你们都怎么保存的?灌胶不是只要没气泡就可以了么?还有什么特别的要求?...

我们今天又做了一次,昨天就配好了,也凝了,放在冰箱冻了一晚上,结果今天做的结果真是惨不忍睹,现在正在染色,不知道效果会不会惨不忍睹。。

条带在浓缩胶那是以一条线的,结果到了分离胶就有点斜了,还有一组是在分离胶里面以成团的形式。万念俱灰啊!!!

其实凝好的胶当时就用是最好的,要不然就放在冰箱里,否则基本就废了把。。最好当时凝当时就用。
20楼2013-06-25 11:25:35
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