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wtj505531480

木虫 (小有名气)

[求助] 怎么观察植物细胞壁

怎么观察细胞壁并且可以看出来里面的纤维素,木质素的分布,谢谢。
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mars_2135

铁杆木虫 (小有名气)

植物摄影师

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
wtj505531480: 金币+15, ★★★很有帮助 2013-10-21 11:06:32
要看纤维素和木质素的分布,或许可以采用组织化学制片法,楼上讲的是普通的石蜡切片法,这种方法看不到纤维素和木质素的分布的。最好能查资料找一找纤维素和木质素的特异性染料,或者用其带有荧光标记特异性免疫蛋白偶联一下,然后用荧光显微镜或者激光共聚焦显微镜观察,被标记的部位会发现荧光,就可以定位了。
3楼2013-10-19 15:42:43
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还是植物好

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
wtj505531480: 金币+5, 有帮助 2013-10-21 11:06:08
采用常规石蜡制片法 和离析方法
1、选取材料
2、固定材料
3、对材料进行脱水
4、对材料进行透明
5、浸蜡
6、包埋
7、切片
8、展片及粘片
9、脱蜡、染色
  将烘干后的玻片放在纯二甲苯中,然后放入恒温箱中,将恒温箱的温度调制35℃左右,脱蜡4-5天,然后取出再放入新的纯二甲苯中,浸泡2-3分钟,最后在放入体积比为1:1的二甲苯和无水乙醇的混合溶液中,继续浸泡2-3分钟。
  使用番红和固绿两种染色剂对脱蜡的材料进行染色。首先,依次经过无水乙醇、无水乙醇、95%乙醇、85%乙醇、75%乙醇、65%乙醇,分别停留2-3分钟,然后放入番红染液中染色0.5-1小时,在依次经过浓度为65%乙醇、75%乙醇、85%乙醇,分别停留2-3分钟,然后放入固绿染液中染色同样2-3分钟,再分别经过95%乙醇、无水乙醇、无水乙醇、1/2二甲苯+1/2无水乙醇、纯二甲苯、纯二甲苯,分别停留2-3分钟,取出即可。
10、封片及观察
因为番红能够对植物的木质化、栓质化和角质化部分进行染色,(染色后的部分为红色,染色时间一般为2~24h)所以在显微镜下可以观察到细胞壁的表观结构。
离析方法在导管筛管等形态观察中有着重要作用,也可用来观察细胞壁木质束。
还是植物好
2楼2013-10-19 10:58:45
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wtj505531480

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by mars_2135 at 2013-10-19 15:42:43
要看纤维素和木质素的分布,或许可以采用组织化学制片法,楼上讲的是普通的石蜡切片法,这种方法看不到纤维素和木质素的分布的。最好能查资料找一找纤维素和木质素的特异性染料,或者用其带有荧光标记特异性免疫蛋白 ...

这种方法能做到定量或者半定量的分析吗?谢谢了
4楼2013-10-21 11:05:46
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mars_2135

铁杆木虫 (小有名气)

植物摄影师

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by wtj505531480 at 2013-10-21 11:05:46
这种方法能做到定量或者半定量的分析吗?谢谢了...

不好意思,很少来论坛,所以回复的比较晚,据说可以根据荧光强弱进行定量分析,但是我没有做过,最好能找着这些文献来看看。
5楼2013-11-27 13:25:43
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