24小时热门版块排行榜    

查看: 3592  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

liuqingpucy

金虫 (著名写手)

[求助] westernblot 目标蛋白无条带 已有4人参与

我做的westernblot目标蛋白是P-Akt(60kDa),内参为GAPDH(37kDa),转膜时间为100V 1.5h 湿转,marker都转了上去,做出来GAPDH条带很好,P-Akt却没有条带,这是什么原因啊???求助
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

可能Akt的量比GAPDH太少,尤其是在一起曝光;提取蛋白时要加磷酸酶抑制剂,防止p-Akt去磷酸化。
8楼2014-02-13 09:03:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

annyuan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuqingpucy: 金币+2, 有帮助 2013-06-06 20:31:20
amisking: 金币+6, 鼓励新虫发帖交流,欢迎常来! 2013-06-06 22:02:36
会不会是抗体的原因?一抗没有与膜上的P-Akt有效结合。你有设置阳性对照吗?
2楼2013-06-06 17:06:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuqingpucy: 金币+2, 有帮助 2013-06-06 20:31:26
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-06-07 08:46:40
P-Akt一抗是自己做的么?需要先找抗体的原因。可以先做个elisa试试
3楼2013-06-06 17:07:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秋水素心

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liuqingpucy: 金币+2, 有帮助 2013-06-06 20:31:33
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-06-07 08:46:30
如果你确定你的蛋白有表达的话,就是抗体的问题,最大的问题估计在抗体浓度上
认真过好每一天!
4楼2013-06-06 18:25:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[文学芳草园] 梦想 +4 myrtle 2026-08-26 4/200 2026-08-31 08:43 by 逸域隐帆
[基金申请] 面上意见出来了 +10 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 19/950 2026-08-31 08:01 by blueearth171
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +6 gdd2018 2026-08-28 11/550 2026-08-30 08:58 by 超级无敌华子
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已,这评审意见是按照杰青的条件评的吧? +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 哪位高人中了,把查询到的截图贴出来让我看看,让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
请填处理意见