版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4145)
>基金申请 (235)
>虫友互识 (165)
>文献求助 (152)
>导师招生 (112)
>考博 (85)
>硕博家园 (80)
>找工作 (49)
>论文投稿 (49)
>考研 (45)
>论文道贺祈福 (38)
>教师之家 (38)
>公派出国 (38)
>博后之家 (36)
>招聘信息布告栏 (28)
>休闲灌水 (21)

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liuqingpucy

金虫 (著名写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1238.4
散金: 1001
帖子: 1017
在线: 263.6小时
虫号: 1281407
注册: 2011-04-29
性别: GG
专业: 中药质量评价

[求助] westernblot 目标蛋白无条带已有4人参与

我做的westernblot目标蛋白是P-Akt（60kDa），内参为GAPDH（37kDa），转膜时间为100V 1.5h 湿转，marker都转了上去，做出来GAPDH条带很好，P-Akt却没有条带，这是什么原因啊？？？求助

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

面上意见出来了已经有18人回复
有多少人是今天查系统知道结果的？已经有19人回复
能否申诉？已经有4人回复
找导师已经有7人回复
售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急已经有4人回复
售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急已经有5人回复
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急已经有4人回复
售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急已经有6人回复
有没有仍没收到信息的已经有7人回复
国社科又开始会评了，不知道这次命运如何已经有4人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

透析袋的选择—目标蛋白分子量446KDa，要去除的蛋白分子量56KDa 已经有4人回复
10kd 和100kd的蛋白同时做western blot 已经有11人回复
想粗略的测试目标蛋白是否与DNA有结合能力，应该用什么方法？已经有9人回复
104KD的蛋白，做western blot电泳和转膜时间及膜的选择？已经有21人回复
western blot分别做犬血清白蛋白和犬alpha干扰素的一抗、二抗推荐选择，谢谢！！已经有9人回复
14kd的蛋白，做westernblot，电转条件是怎样的已经有11人回复
有没有人用Western blot在做17kDa蛋白质,求经验！！！已经有22人回复
蛋白的斑点杂交能像WERTERN BLOT一样检验蛋白的抗原性吗已经有6人回复
免疫印迹技术服务(western blot) 已经有56人回复
western blot中蛋白质转印问题已经有17人回复
Western Blot实验的蛋白条带都连在一起已经有37人回复
请教western blot 时蛋白稀释液情况已经有4人回复
Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助已经有22人回复
【求助/交流】westernblot 已经有10人回复
【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题已经有10人回复
【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？已经有9人回复
【求助/交流】转膜已经有15人回复
【求助/交流】westernblot的背景怎么消除呀已经有10人回复
【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带已经有41人回复
【求助/交流】western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗，怎么还能和一抗结合？已经有13人回复
Western Blot 磷酸化蛋白测定问题已经有9人回复

1楼 2013-06-06 16:38:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

秋水素心

银虫 (小有名气)

应助: 18 (小学生)
金币: 345.9
红花: 2
帖子: 193
在线: 56.4小时
虫号: 1067773
注册: 2010-08-01
专业: 基础兽医学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuqingpucy: 金币+2, ★有帮助 2013-06-06 20:31:33
wizardfan: 金币+2, 谢谢分析 2013-06-07 08:46:30

如果你确定你的蛋白有表达的话，就是抗体的问题，最大的问题估计在抗体浓度上

认真过好每一天！

4楼2013-06-06 18:25:29

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 10 个回答

annyuan

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 11.1
帖子: 4
在线: 1.2小时
虫号: 2498686
注册: 2013-06-06

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuqingpucy: 金币+2, ★有帮助 2013-06-06 20:31:20
amisking: 金币+6, 鼓励新虫发帖交流，欢迎常来！ 2013-06-06 22:02:36

会不会是抗体的原因？一抗没有与膜上的P-Akt有效结合。你有设置阳性对照吗？

2楼2013-06-06 17:06:04

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

ericyo918

至尊木虫 (知名作家)

应助: 156 (高中生)
金币: 15157.4
散金: 846
红花: 20
帖子: 5085
在线: 1447.8小时
虫号: 1808878
注册: 2012-05-10
性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuqingpucy: 金币+2, ★有帮助 2013-06-06 20:31:26
wizardfan: 金币+2, 鼓励发帖交流 2013-06-07 08:46:40

P-Akt一抗是自己做的么？需要先找抗体的原因。可以先做个elisa试试

3楼2013-06-06 17:07:22

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

八头小猪

铁杆木虫 (小有名气)

应助: 4 (幼儿园)
金币: 5323.3
红花: 1
帖子: 168
在线: 260.9小时
虫号: 1038414
注册: 2010-06-08
性别: GG
专业: 微生物遗传学

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liuqingpucy: 金币+2, ★有帮助 2013-06-06 20:31:39
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-06-07 08:46:52

一抗浓度提高，室温下1小时以上，然后4度过夜（转膜可以提高电压，缩短时间也行）

5楼2013-06-06 20:23:13

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 10 个回答

最具人气热帖推荐 [查看全部]		作者	回/看	最后发表

	[考博] 找导师 +6	yuanjiabao 2026-08-29	7/350	2026-08-30 14:40 by 生科新手
	[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3	jCd0dEvKHShX 2026-08-29	5/250	2026-08-30 14:03 by GkCVyODlx4mR
	[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3	gy1nBQXYQJqL 2026-08-29	5/250	2026-08-30 11:52 by l0VvVHGBGRLv
	[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5	ASdOkHsho7FD 2026-08-28	9/450	2026-08-30 11:41 by l0VvVHGBGRLv
	[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +6	ASdOkHsho7FD 2026-08-28	9/450	2026-08-30 11:30 by l0VvVHGBGRLv
	[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6	ASdOkHsho7FD 2026-08-28	9/450	2026-08-30 11:19 by l0VvVHGBGRLv
	[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6	gouxfjh 2026-08-28	11/550	2026-08-30 07:57 by gouxfjh
	[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3	G6APbkg8SA6w 2026-08-29	4/200	2026-08-30 07:39 by ZPa0EcMwuECS
	[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3	G6APbkg8SA6w 2026-08-29	4/200	2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
	[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3	G6APbkg8SA6w 2026-08-29	4/200	2026-08-30 07:28 by ZPa0EcMwuECS
	[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5	gy1nBQXYQJqL 2026-08-29	6/300	2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
	[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +4	tannykie 2026-08-29	4/200	2026-08-29 17:14 by lmz0216
	[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5	叶九微 2026-08-26	5/250	2026-08-27 10:35 by l_zh2008
	[基金申请] 我不理解！ +15	Edward_pc 2026-08-26	23/1150	2026-08-26 20:34 by zzuzxg
	[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4	bjdxyxy 2026-08-26	4/200	2026-08-26 13:12 by qingmu1201
	[基金申请] 国合里面能看到了 +7	一怀馨秋 2026-08-26	7/350	2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
	[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6	wittyboy 2026-08-26	14/700	2026-08-26 10:55 by wittyboy
	[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10	chengyan1220 2026-08-24	20/1000	2026-08-26 08:57 by peasantsprig
	[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8	beefly 2026-08-26	8/400	2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
	[基金申请] 明天应该可查了！？ +6	chengyan1220 2026-08-23	6/300	2026-08-25 19:45 by zfd97