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once1015

木虫 (正式写手)

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专业: 生物大分子结构与功能

[求助] 酶的米氏常数和解离常数

我是做结构生物学的，是微生物领域的小菜，现在得到一个比较有意思的酶的结构。现在需要补充功能性实验。但是因为反应速度太快，用双倒数法做图获得的Km值都很不稳定。现在刚好有ITC的设备，想测量一下酶与底物的解离常数 Kd，然后用这个数据显示酶与底物的亲和力如何，可以吗？

谢谢您的帮助！

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酶工程

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1楼2013-05-30 10:55:16

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OD黑客

银虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
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引用回帖:

2楼: Originally posted by 志子 at 2013-05-30 12:02:44
不稳定，，，，，给个提示
酶促反应速度只在最初一段时间内保持恒定，随着反应时间的延长，酶促反应速度逐渐下降。原因有多种，如底物浓度降低，产物浓度增加而对酶产生抑制作用并加速逆反应的进行，酶在一定pH及温 ...

你好，最近在做有关酶活性测定实验，但是测定过程中遇到很多问题，能简单向你请教一番吗？谢谢

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9楼2018-07-12 20:01:47

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志子

至尊木虫 (文坛精英)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
once1015: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-30 12:49:08
laozuzunzhe: 金币+4, good！ 2013-05-30 19:34:46
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助！ 2013-09-12 11:18:23

不稳定，，，，，给个提示
酶促反应速度只在最初一段时间内保持恒定，随着反应时间的延长，酶促反应速度逐渐下降。原因有多种，如底物浓度降低，产物浓度增加而对酶产生抑制作用并加速逆反应的进行，酶在一定pH及温度下部分失活等。因此，研究酶的活力以酶促反应的初速度为准。
为获得准确的实验结果，应尽量减少实验操作中带来的误差。因此配制各种底物溶液时应用同一母液进行稀释，保证底物浓度的准确性。各种试剂的加量也应准确，并严格控制准确的酶促反应时间。

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2楼2013-05-30 12:02:44

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