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once1015木虫 (正式写手)
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[求助]
酶的米氏常数 和 解离常数
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我是做结构生物学的，是微生物领域的小菜，现在得到一个比较有意思的酶的结构。 现在需要补充功能性实验。 但是因为 反应速度太快， 用双倒数法做图获得的Km值 都很不稳定。 现在刚好有ITC的设备， 想测量一下酶与底物的解离常数 Kd， 然后用这个数据 显示 酶与底物的亲和力如何， 可以吗？ 谢谢您的帮助！ |
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 酶工程 |
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5楼2013-07-31 14:55:29
志子
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【答案】应助回帖
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不稳定，，，，，给个提示 酶促反应速度只在最初一段时间内保持恒定，随着反应时间的延长，酶促反应速度逐渐下降。原因有多种，如底物浓度降低，产物浓度增加而对酶产生抑制作用并加速逆反应的进行，酶在一定pH及温度下部分失活等。因此，研究酶的活力以酶促反应的初速度为准。 为获得准确的实验结果，应尽量减少实验操作中带来的误差。因此配制各种底物溶液时应用同一母液进行稀释，保证底物浓度的准确性。各种试剂的加量也应准确，并严格控制准确的酶促反应时间。 |
2楼2013-05-30 12:02:44
once1015
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3楼2013-05-30 12:48:50
志子
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4楼2013-05-30 12:55:53
30