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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 酶的米氏常数 和 解离常数
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once1015

木虫 (正式写手)

[求助] 酶的米氏常数 和 解离常数

我是做结构生物学的，是微生物领域的小菜，现在得到一个比较有意思的酶的结构。 现在需要补充功能性实验。 但是因为 反应速度太快， 用双倒数法做图获得的Km值 都很不稳定。 现在刚好有ITC的设备， 想测量一下酶与底物的解离常数 Kd， 然后用这个数据 显示 酶与底物的亲和力如何， 可以吗？

谢谢您的帮助！
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1楼2013-05-30 10:55:16
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once1015

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 志子 at 2013-05-30 12:02:44
不稳定，，，，，给个提示
酶促反应速度只在最初一段时间内保持恒定，随着反应时间的延长，酶促反应速度逐渐下降。原因有多种，如底物浓度降低，产物浓度增加而对酶产生抑制作用并加速逆反应的进行，酶在一定pH及温 ...

谢谢 您的帮助， 我测了几次 重复性很差。

所以决定用ITC直接测量了，现在发现ITC可以直接得到 酶的Km与Kcat 那就用这个吧。
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3楼2013-05-30 12:48:50
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志子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
once1015: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-30 12:49:08
laozuzunzhe: 金币+4, good！ 2013-05-30 19:34:46
laozuzunzhe: 金币+3, 鼓励热心应助！ 2013-09-12 11:18:23
不稳定，，，，，给个提示
酶促反应速度只在最初一段时间内保持恒定，随着反应时间的延长，酶促反应速度逐渐下降。原因有多种，如底物浓度降低，产物浓度增加而对酶产生抑制作用并加速逆反应的进行，酶在一定pH及温度下部分失活等。因此，研究酶的活力以酶促反应的初速度为准。
为获得准确的实验结果，应尽量减少实验操作中带来的误差。因此配制各种底物溶液时应用同一母液进行稀释，保证底物浓度的准确性。各种试剂的加量也应准确，并严格控制准确的酶促反应时间。
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2楼2013-05-30 12:02:44
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志子

至尊木虫 (文坛精英)
引用回帖:
3楼: Originally posted by once1015 at 2013-05-30 12:48:50
谢谢 您的帮助， 我测了几次 重复性很差。

所以决定用ITC直接测量了，现在发现ITC可以直接得到 酶的Km与Kcat 那就用这个吧。...

好吧，科技是比人力来的快和更精确，祝好啦！！！
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4楼2013-05-30 12:55:53
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dashi123

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2013-07-31 14:55:29
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