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树枝儿

新虫 (初入文坛)

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[求助] 荧光定量PCR进行二重检测怎样处理FAM 和VIC信号相互干扰的问题？（ABI StepOne Plus）

各位大虾：
本人在做医疗诊断的应急项目，其中涉及到荧光定量双通道的二重检测，于是我选定了大部分人选用的搭配 FAM 和VIC通道，其中与FAM 对应的淬灭基因为BHQ，与VIC通道对应的淬灭基因为TAMRA。在检测的过程中总是出现FAM通道的信号漏到VIC通道，有时也能反过来，刚开始以为是模板的污染或者是仪器校正的问题，结果一一排除了，后来有人说是仪器本身的物理因素造成的，FAM和VIC荧光波长本来就有重叠的部分，这也是事实，可是这样会造成结果的判读有问题，各位做荧光的大虾给我指点指点迷津：或是规范结果判断的方法或是减少荧光干扰。多谢了啦！
为了方便大家了解情况，我将干扰情况截图如下：

双重检测扩增曲线.jpg

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1楼2013-05-27 17:27:22

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yuyixst

木虫 (正式写手)

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myprayer: 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-05-30 10:08:54

没办法了，把VIC换成ROX或者CY5就好了