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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] 求碱性蛋白native-page配方及电泳方法 已有1人参与

我的蛋白的等电点在8点多,现在要做蛋白的native-page,已经按碱性蛋白的native-page的配方   分离碱性蛋白
   要用低pH凝胶系统,并使用以下缓冲液体系:
   1. 分离胶:0.06M KOH,0.376M Ac,pH4.3(7.7% T,2.67% C);
   2. 堆积胶:0.06M KOH,0.063M Ac,pH6.8(3.125% T,25% C);
   3. 电泳缓冲液:0.14M 2-丙氨酸,0.35M Ac,pH4.5
   将正负电极倒置,用甲基绿(0.002%)为示踪剂
跑过一次电泳,但是没有条带,哪位大侠知道碱性蛋白的native-page胶的配方及电泳注意事项啊?!多谢啦呀

[ Last edited by 1949stone on 2013-5-27 at 10:44 ]
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)

【答案】应助回帖

那木我的意见是改用SDS-PAGE,如果一定要用电泳的话。
9楼2013-06-17 10:06:52
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志子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-26 16:50:33
试试把APS和TEMED的用量加倍,再看看凝结情况
2楼2013-05-26 14:35:15
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 志子 at 2013-05-26 14:35:15
试试把APS和TEMED的用量加倍,再看看凝结情况

5ml的胶量APS加了75ul, TEMED加了25ul,这个量还不够大吗?胶的凝结也没什么问题!跟胶的凝结情况有关系吗?!
3楼2013-05-26 15:46:46
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

自己顶一下,做过的大侠帮帮忙呗
4楼2013-05-27 09:01:14
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