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飘零的叶子

新虫 (小有名气)

[求助] 求碱性蛋白native-page配方及电泳方法 已有1人参与

我的蛋白的等电点在8点多，现在要做蛋白的native-page，已经按碱性蛋白的native-page的配方　　　分离碱性蛋白
　　　要用低pH凝胶系统，并使用以下缓冲液体系：
　　　1. 分离胶：0.06M KOH，0.376M Ac，pH4.3（7.7% T，2.67% C）；
　　　2. 堆积胶：0.06M KOH，0.063M Ac，pH6.8（3.125% T，25% C）；
　　　3. 电泳缓冲液：0.14M 2-丙氨酸，0.35M Ac，pH4.5
　　　将正负电极倒置，用甲基绿（0.002%）为示踪剂
跑过一次电泳，但是没有条带，哪位大侠知道碱性蛋白的native-page胶的配方及电泳注意事项啊？！多谢啦呀

[ Last edited by 1949stone on 2013-5-27 at 10:44 ]
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1楼 2013-05-26 08:57:32
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 凌波丽 at 2013-06-16 15:25:17
非变性凝胶电泳中，样品蛋白质的PH是重要的影响因素，要根据样品蛋白质的pI值来选定合适的电泳缓冲溶液，电泳缓冲溶液的pH只应该高于样品蛋白质的pI值。

你把电泳缓冲溶液换成1.5 M Tris-HCl，pH 8.8试试看吧。

用过1.5M Tris-HCl ph8.8，一样没有条带
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8楼2013-06-17 09:18:26
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志子

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-26 16:50:33
试试把APS和TEMED的用量加倍，再看看凝结情况
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2楼2013-05-26 14:35:15
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 志子 at 2013-05-26 14:35:15
试试把APS和TEMED的用量加倍，再看看凝结情况

5ml的胶量APS加了75ul， TEMED加了25ul，这个量还不够大吗？胶的凝结也没什么问题！跟胶的凝结情况有关系吗？！
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3楼2013-05-26 15:46:46
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飘零的叶子

新虫 (小有名气)
自己顶一下，做过的大侠帮帮忙呗
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4楼2013-05-27 09:01:14
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