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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 求助 sds-page 条带虚，marker 最后一条带拖尾
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朱青青1988

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助 sds-page 条带虚，marker 最后一条带拖尾

如图，我的marker最后一条带很丑，蛋白条带很虚，很淡不清楚，我的电压80V一个小时，120一个半小时 我是在冰上跑的，蛋白大概17kd .我的buffer 是新的，应该不是样品的问题，以前也跑过没有，没有这种情况。我的分离胶15%
求助 sds-page 条带虚，marker 最后一条带拖尾
DSC09604.JPG

[ Last edited by 朱青青1988 on 2013-5-24 at 21:21 ]
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1楼 2013-05-24 21:15:02
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
朱青青1988(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-25 18:46:26
没有问题，我的MWM经常都是这样。

我发现有时候新鲜的样品的带很sharp，放了几天就虚了，加入DTT后有好转，可能蛋白质氧化了。不过一般不介意这些小变化。
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2楼2013-05-25 08:28:30
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
疏水性强的蛋白的带往往不是很sharp。你的目的蛋白是膜蛋白吗？
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3楼2013-05-25 09:12:58
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唐朝豪放男

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
朱青青1988(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-25 18:46:34
浓缩胶太少了，想要好看，配胶的时候浓缩胶多铺点，增加样品在浓缩胶中跑的距离，这样就可以压平了
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4楼2013-05-25 11:09:29
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朱青青1988

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-05-25 09:12:58
疏水性强的蛋白的带往往不是很sharp。你的目的蛋白是膜蛋白吗？

不是膜蛋白，但是我的mrker 也很拖啊
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5楼2013-05-25 13:00:17
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朱青青1988

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mitocam at 2013-05-25 08:28:30
没有问题，我的MWM经常都是这样。

我发现有时候新鲜的样品的带很sharp，放了几天就虚了，加入DTT后有好转，可能蛋白质氧化了。不过一般不介意这些小变化。

可是MRKER也很拖尾啊，是不是还是胶的问题
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6楼2013-05-25 13:01:16
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朱青青1988

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by mitocam at 2013-05-25 08:28:30
没有问题，我的MWM经常都是这样。

我发现有时候新鲜的样品的带很sharp，放了几天就虚了，加入DTT后有好转，可能蛋白质氧化了。不过一般不介意这些小变化。

可是MRKER也很拖尾啊，是不是还是胶的问题
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7楼2013-05-25 13:01:24
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一月lyj

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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朱青青1988(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-25 18:46:44
我跑的marker有时也是上面打的还挺好，到后面几个就有点虚了。试试减少marker的量。
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8楼2013-05-25 17:02:55
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mitocam

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
朱青青1988: 金币+7, ★★★★★最佳答案 2013-05-27 15:05:00
引用回帖:
7楼: Originally posted by 朱青青1988 at 2013-05-25 13:01:24
可是MRKER也很拖尾啊，是不是还是胶的问题...

应该不是胶的问题，因为其它带还是很sharp的，只有小分子量的蛋白质带变虚，因为小蛋白质受氧化或其它修饰，更容易引起迁移率的变化。

在样品和marker中加些DTT试试。
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9楼2013-05-25 18:31:40
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
朱青青1988: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-05-27 15:04:22
引用回帖:
5楼: Originally posted by 朱青青1988 at 2013-05-25 13:00:17
不是膜蛋白，但是我的mrker 也很拖啊...

小分子量区条带有些虚还算是正常吧。可能是上样buffer中的还原剂量不足或者是分离胶的tris缓冲液的pH不十分准确。
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10楼2013-05-26 01:42:16
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