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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 请教大神HPLC紫外吸收波长的问题
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badgv

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教大神HPLC紫外吸收波长的问题

如果我用UV检测器测一个样品，分在354和254这两种波长下面，所有的物质都有吸收，但是在354波长下面是主峰的最大吸收波长，请问在这两种波长下面，测得的主峰的纯度按面积归一法是一样的吗？
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1楼 2013-05-20 09:08:58
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

swallow13

禁虫 (正式写手)
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4楼2013-05-20 09:51:32
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bomblei

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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badgv: 金币+2 2013-05-20 10:39:03
我们做分离的时候遇到过这样的情况，在254吸收比较好，峰面积95%，但220吸收稍弱，别的杂质吸收明显增高，目标物峰面积只有85%。这样的样品我们是不能通过的，也就是说按最低的算含量。希望这个例子对你有帮助
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多请教，多学习！
8楼2013-05-20 10:31:48
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swallow13

禁虫 (正式写手)
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2楼2013-05-20 09:25:50
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winnie的爱

木虫 (著名写手)

Mr?W逍遥

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badgv: 金币+1 2013-05-20 10:39:24
肯定是不一样的，有吸收但不是最大吸收跟最大吸收之间峰面积都是不一样的，按面积归一出来的百分比也不一样
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5楼2013-05-20 10:05:06
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yugijiang

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个要看你物质的吸收系数是不是一致的了
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7楼2013-05-20 10:25:05
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swallow13

禁虫 (正式写手)
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9楼2013-05-20 10:50:53
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bomblei

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by swallow13 at 2013-05-20 10:50:53
我感觉这种做法是不科学的 有可能杂质在该波长下吸收很强 从而导致杂质含量虚高...

肯定有这种可能，但也有确实含量不够的可能，所以在公司企业，为别人做分离纯化，这样的样品是不能交货的，宁缺毋滥。
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10楼2013-05-20 10:59:39
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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badgv: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-05-20 13:10:24
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3楼: Originally posted by badgv at 2013-05-20 09:32:23
我问的不是这个问题啊，我的意思是，我测一个东西里面所有的杂质在这两种波长下面都会有紫外吸收，其中一个波长是主峰的最大吸收波长，在这两种波长下面测得的纯度是不是一样的...

不是一样的，如果其他的峰你也想积分的话最好选择254nm，因为大部分的物质在长波长下不响应或者响应比较低，这样面积归一法会导致测试结果虚高
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11楼2013-05-20 13:05:15
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普通回帖

badgv

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by swallow13 at 2013-05-20 09:25:50
面积归一化法测样品的纯度是在一个前提下：杂质与主要物质在该波长下吸收值一致 所以用面积归一化法检测产品纯度时 需要验证破坏性实验的物料平衡 即降解产物峰加主峰面积与未破坏的主峰面积基本一致

我问的不是这个问题啊，我的意思是，我测一个东西里面所有的杂质在这两种波长下面都会有紫外吸收，其中一个波长是主峰的最大吸收波长，在这两种波长下面测得的纯度是不是一样的
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3楼2013-05-20 09:32:23
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badgv

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by winnie的爱 at 2013-05-20 10:05:06
肯定是不一样的，有吸收但不是最大吸收跟最大吸收之间峰面积都是不一样的，按面积归一出来的百分比也不一样

那我测定一个样品的时候，如果我用354nm的时候，主物质的吸收是最大的，但是有可能有的杂质在这个波长下面一点吸收都没有，如果用254nm，主物质虽然不是最大吸收波长，但在这种情况下所有的杂质都是有吸收的，这种情况下，我是选择354nm呢还是254nm呢？这两种情况都用百积归一化法哪个纯度更准确些呢？
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6楼2013-05-20 10:24:12
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