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zongsheng09

木虫 (正式写手)

[求助] 求解审稿专家有关文章中的Western blots意见

小虫投了一篇Journal of Molecular Medicine，文章修回
其中一位审稿专家的一条意见是如下：
“At a technical level, the authors need to show specific binding of antibodies to proteins in Western blots (for Nrf2, Orai1, Stim1) as commercial antibodies are frequently non-specific. This can be done, for instance, by RNAi. List companies antibodies were purchased from and clone numbers. Show entire Western blots (at least in Supplemental Figures), not just isolated bands. It is impossible to evaluate if these bands are specific for the proteins they are supposed to represent.”

前面的意思我能理解，就是要求给出详细的抗体厂家和克隆类型，但是接下来的要求在Supplemental Figures增加“entire Western blots”，小虫实在不理解，求各位虫友给出宝贵意见！

Ps：我的WB图片都是，暗室曝光后的胶片，扫描后剪切的成几个一横行的条带，与SCI文章中常见图片无异
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1楼 2013-05-19 22:39:37
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goslar

木虫 (职业作家)

我不再应助!

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
他要求把整张 western blot 的图片放在 supplementary
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无故被警告,非常失望,我不再应助!
2楼2013-05-19 22:43:13
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zongsheng09

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by goslar at 2013-05-19 22:43:13
他要求把整张 western blot 的图片放在 supplementary

整张？我一张膜肯定要分开孵育不同的一抗
曝光后也在两张胶片上啊
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3楼2013-05-19 22:48:29
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goslar

木虫 (职业作家)

我不再应助!

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
zongsheng09: 金币+30, ★★★很有帮助, 10 2013-05-20 09:28:30
引用回帖:
3楼: Originally posted by zongsheng09 at 2013-05-19 22:48:29
整张？我一张膜肯定要分开孵育不同的一抗
曝光后也在两张胶片上啊...

这样做方发不对
起码要证明你第一抗没有 non-specific binding
应该可以做几张一样的 blot, 然后把整张 western blot 用不同的一抗孵育
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无故被警告,非常失望,我不再应助!
4楼2013-05-20 06:18:17
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zongsheng09

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by goslar at 2013-05-20 06:18:17
这样做方发不对
起码要证明你第一抗没有 non-specific binding
应该可以做几张一样的 blot, 然后把整张 western blot 用不同的一抗孵育...

我似乎理解了一点，但是还不是完全明白，求详细一点的解释
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5楼2013-05-20 09:29:06
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goslar

木虫 (职业作家)

我不再应助!
引用回帖:
5楼: Originally posted by zongsheng09 at 2013-05-20 09:29:06
我似乎理解了一点，但是还不是完全明白，求详细一点的解释...

因为没有看到整张 western blot, 所以 reviewer 不肯定一抗是不是 specific

这个可算是补做的 control experiment, 只要每个一抗做一次 western blot, 没有 non-specific band 就可以了

然后把这结果加在 supplementary material
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无故被警告,非常失望,我不再应助!
6楼2013-05-20 10:15:44
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zongsheng09

木虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by goslar at 2013-05-20 10:15:44
因为没有看到整张 western blot, 所以 reviewer 不肯定一抗是不是 specific

这个可算是补做的 control experiment, 只要每个一抗做一次 western blot, 没有 non-specific band 就可以了

然后把这结果加在 su ...

感谢！不过我还是想说这个审稿人是不是有点太苛刻了？
你认为呢？
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7楼2013-05-27 15:55:14
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goslar

木虫 (职业作家)

我不再应助!
引用回帖:
7楼: Originally posted by zongsheng09 at 2013-05-27 15:55:14
感谢！不过我还是想说这个审稿人是不是有点太苛刻了？
你认为呢？...

不是, 这个是 western blot 的基本要求
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无故被警告,非常失望,我不再应助!
8楼2013-05-27 19:04:09
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