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cjlovesen

铜虫 (小有名气)

[求助] DGGE中,提取土壤DNA后做V3扩增,出现两条带

大家好,我做的DGGE,提取土壤DNA后做V3扩增,出现两条带,pcr扩增用的是降落pcr,30个循环,不知道什么情况,请大家帮帮忙!
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做就做最好的
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waldenpond

金虫 (著名写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cjlovesen at 2013-05-29 22:06:03
提取土壤DNA不能晾干吧?微生物会失去好多把,我现在用梯度降温pCR做出来了,是一条带!谢谢您...

请问楼主,梯度降温PCR是什么啊?不是你开始提的touchdown pcr么?
我最近用一种细菌DNA 16S V3引物PCR-DGGE,也做出两条带,不像是污染,但是没法解释,楼主怎么解决的这个问题啊?
7楼2013-06-03 14:54:01
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xiadongliang

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-06 10:58:38
图上来看看。
你的土壤样本里是否含有植物的根须等?
如果有,可能就是扩增的植物DNA中的同源序列了。

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-05-20 09:09:41
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cjlovesen

铜虫 (小有名气)

那取样回来之后,怎么去除这些根茎叶,因为这些都太小了,而且是湿的土样,也没法过筛,请教
做就做最好的
3楼2013-05-25 14:07:31
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cjlovesen

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiadongliang at 2013-05-20 09:09:41
图上来看看。
你的土壤样本里是否含有植物的根须等?
如果有,可能就是扩增的植物DNA中的同源序列了。

那取样回来之后,怎么去除这些根茎叶,因为这些都太小了,而且是湿的土样,也没法过筛,请教,还有就是这些DNa对研究土壤区系DGGE有影响吗?
做就做最好的
4楼2013-05-25 14:12:10
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