24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1695  |  回复: 15

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 三撇五撇 at 2013-05-18 15:34:10
第一轮可以用梯度,从65度开始退火,每个循环下降0.7度,(我一般用0.7度)30个循环,然后第二轮再用正常的退火温度,根据你的GC含量设置退火温度试试.

您好,温度梯度我做过了,从57度到52度,每个梯度1度,但是还是不行,要崩溃了。以前怀疑引物有问题,生工的引物,重新合成后还是这样,别人说巢式很容易做,为什么我做不下去了呢???
11楼2013-05-20 21:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三撇五撇

银虫 (小有名气)

引用回帖:
11楼: Originally posted by ljx2ljx at 2013-05-20 21:29:04
您好,温度梯度我做过了,从57度到52度,每个梯度1度,但是还是不行,要崩溃了。以前怀疑引物有问题,生工的引物,重新合成后还是这样,别人说巢式很容易做,为什么我做不下去了呢???...

试试两步法?
95   3min
98   12s
68   20s+延伸时间
72  5min
12楼2013-05-21 09:09:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

孤城一片

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

巢氏PCR第一轮应该是有东西的,只是是弥散的,假如相当干净,就是做第二轮,没模板怎么会有结果呢
本意探花郎,奈何芷若香;寄意予青陆,共沐好蟾光。
13楼2013-05-21 14:11:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
13楼: Originally posted by 孤城一片 at 2013-05-21 14:11:06
巢氏PCR第一轮应该是有东西的,只是是弥散的,假如相当干净,就是做第二轮,没模板怎么会有结果呢

那么像我这种情况究竟是什么原因呢,我的引物设计是没有问题的,退火温度梯度也做过了,我用左QPCR的引物可以特异性扩增(P了两个类群都出来了),反而这个兼并引物扩增出来的搞不定,请您赐教!!!
14楼2013-05-21 14:17:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 三撇五撇 at 2013-05-21 09:09:51
试试两步法?
95   3min
98   12s
68   20s+延伸时间
72  5min...

现在引物又重新再鼎国合成,明天到。再试试,不行的话就崩溃了,
15楼2013-05-21 14:18:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ljx2ljx

新虫 (初入文坛)

问题已经得到解决,我换了另一家的试剂盒就可以扩增出来了,多谢各位!
16楼2013-05-25 09:18:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ljx2ljx 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂 +15 A child 2026-04-04 15/750 2026-04-07 09:46 by wff_6994928
[考研] 求调剂 一志愿西南交通大学085701环境工程 282分 +11 多多爱吃汉堡 2026-04-04 11/550 2026-04-07 08:37 by xihu1109
[考研] 277工科求调剂 +10 1915668 2026-04-04 11/550 2026-04-06 23:53 by 心媛意北
[考研] 考研调剂 +7 15615482637 2026-04-04 7/350 2026-04-06 22:56 by chenzhimin
[考研] 338求调剂 +4 wxygxsaaaaa 2026-04-06 4/200 2026-04-06 17:14 by 尚水阁主
[考研] 求助071001调剂!!! +4 黄守松 2026-04-05 5/250 2026-04-06 10:55 by 1028907439
[考研] 复试调剂 +5 asdasdassda 2026-04-05 5/250 2026-04-06 09:32 by dongzh2009
[考研] 求调剂,一志愿郑州大学材料与化工专硕,英二数二342分,求老师收留 +19 v12abo 2026-04-02 21/1050 2026-04-06 09:29 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿西安交大材料学硕(英一数二)347,求调剂到高分子/材料相关专业 +8 zju51 2026-03-31 10/500 2026-04-06 09:03 by 醉翁wl
[考研] 一志愿同济大学323分(080500)求调剂 +8 yikeniu 2026-04-01 8/400 2026-04-05 18:15 by cql1109
[考研] 083200 333求调剂 +3 十二!! 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:28 by barlinike
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 求生物学调剂 +14 15172915737 2026-04-01 14/700 2026-04-04 20:13 by babysonlkd
[考研] 085701求调剂 +7 龚禹铭 2026-04-04 8/400 2026-04-04 13:49 by 小小树2024
[考研] 本9一志愿2 0854低分专硕286求调剂 +9 芒种111 2026-04-04 9/450 2026-04-04 11:01 by tangruihua
[考研] 化工求调剂 +11 荔香芝士椰奶 2026-04-03 11/550 2026-04-03 22:06 by 啵啵啵0119
[考研] 11408,284分,二战真诚求调剂 +4 12.27 2026-04-02 4/200 2026-04-03 14:14 by dxiaoxin
[考研] 313求调剂 +3 ~微微凉~ 2026-04-03 3/150 2026-04-03 11:25 by 啵啵啵0119
[考研] 重庆大学材料与化工085600,初试370+,求求调剂建议 +8 shzhou_ 2026-04-01 9/450 2026-04-03 09:31 by 蓝云思雨
[考研] 08工科求调剂290分 +5 1314捧花 2026-04-02 8/400 2026-04-02 13:16 by 乔哒哒哒
信息提示
请填处理意见