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不懂sophia

木虫 (初入文坛)

[求助] 关于双酶切作用时间

我要用BamHⅠ和 SphⅠ做双酶切,切质粒和PCR产物,请问80微升体系的加酶量是多少?需要作用多长时间?我试过两种酶各加2微升,处理8小时,但是还是没有切完全,请问是适当增加酶量还是延长酶切时间呢?
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随风飘摇11

木虫 (著名写手)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 笑饮江湖水 at 2014-07-11 17:09:02
酶有点多了吧...

不是有点多,是相当多吧,10ul酶什么概念?!

[ 发自小木虫客户端 ]
天道酬勤
11楼2014-07-12 02:20:47
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光树林

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
不懂sophia(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-17 14:45:46
我一般10ul加入2ul的酶,楼主可以试试加入10ul 的酶。。。不过建议楼主缩小反应体系,50ul试试看,酶切8小时应该是足够的。还有你用的缓冲液是否对两种酶都适用
一路向北
2楼2013-05-16 23:03:13
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Haibara_Ai

铜虫 (小有名气)

有些酶就是很难反应完全,割胶/去磷酸化接着做好了。
3楼2013-05-16 23:47:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
不懂sophia(myprayer代发): 金币+1, 感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-17 14:45:54
这两个酶都挺好用的呀。酶的作用效果与底物的量有关,我一般是1μg质粒加10-15U(不是μl,是酶活单位),切2-3小时。你的80μl酶切体系里加了多少μg质粒?此外,如果底物浓度太高也有可能造成酶切效果不好。
4楼2013-05-17 08:44:10
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