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jack6335铁杆木虫 (正式写手)
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[求助]
蛋白形成多聚体
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大家好，我在做western Blot时发现实际大小是55kDa的蛋白（很多文献上和抗体说明书上都是这么大）显色出来居然大于110kDa，我是将蛋白在沸水中煮5min后跑的SDS-PAGE，怎么会形成多聚体呢？求解答！ |
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢详细的分析 2013-05-15 01:03:31
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢详细的分析 2013-05-15 01:03:31
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不知你的蛋白里有木有二硫键！！！ 我怀疑是共价键形成的二聚体！例如二硫键！！所以你不能很好的打开二硫键！原因有： 1.你的还原剂的还原强度不够！需要你增加还原剂的量，或改变还原剂的种类！巯基乙醇的还原性<DTT的还原性 2.如果你用的是DTT，我猜可能是时间长了，DTT已经不能起作用了！DTT的稳定性比较差，容易被氧化，建议你使用TCEP，TCEP的稳定性>DTT稳定性！ 3.可能是你的二硫键之间相互作用力太大，导致5min并不能使它打开！建议你煮沸的时间长点，煮个10min，或者更长，我曾今有个蛋白就煮沸了30min！ 就这么多吧！ 希望以上意见对你有点用！ |
4楼2013-05-14 18:35:54