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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » pcr引物二聚体
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xuqingchun33

银虫 (小有名气)

[求助] pcr引物二聚体

甲基化pcr的目的产物为100bp，但是总有引物二聚体，TM我已经做了梯度了
takala taq酶0.5ul
10xbuffer   2.5ul
dNTP           2ul
水                13ul
模版           5ul
DMSO         1ul
引物各      0.5ul
25ul体系
预变性95度5min
各位高手请问我该怎么办，帮忙给点意见

1.jpg
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在这个纷绕的世俗世界里，能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切，也是一种境界。
1楼 2013-05-13 14:49:13
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mamjun

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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跟2楼有点类似，PCR扩增完，先不电泳，离心管口用封口膜裹严实，沸水煮5min，之后自然冷却至室温，大概要等1h-2h左右，再电泳，以前试过可以让条带变清晰点，但如果还是跟图上这样的话再试试其他办法咯。
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8楼2013-05-14 16:47:26
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华农夏田

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我之前也遇到了类似的问题，师兄说是不可避免的，可以换一下引物或者把引物沸水浴5min,在冰浴1min，试试看吧！希望有所帮助。
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要科研也要生活
2楼2013-05-13 16:51:10
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wangxin320

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xuqingchun33(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-05-14 11:02:35
重新设计一下引物吧，设计的时候看看软件上面显示出现dimer的情况，选择没有的就最好了
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3楼2013-05-13 17:52:00
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叶伟伟99

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以换个KOD酶试试，
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4楼2013-05-13 22:01:26
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