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xuqingchun33

银虫 (小有名气)

[求助] pcr引物二聚体

甲基化pcr的目的产物为100bp,但是总有引物二聚体,TM我已经做了梯度了
takala taq酶0.5ul
10xbuffer   2.5ul
dNTP           2ul
水                13ul
模版           5ul
DMSO         1ul
引物各      0.5ul
25ul体系
预变性95度5min
各位高手请问我该怎么办,帮忙给点意见

1.jpg
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在这个纷绕的世俗世界里,能够学会用一颗平常的心去对待周围的一切,也是一种境界。
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guojing113

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xuqingchun33(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-14 11:02:44
把你的引物降低到0.3微升,如果目的序列GC含量没有超过65%的话,把DMSO去掉,DMSO是可以影响扩增效率的,另外如果还是不可以的话,在体系里面加2mM的镁离子,祝好运!
听雨
6楼2013-05-14 10:25:19
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华农夏田

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我之前也遇到了类似的问题,师兄说是不可避免的,可以换一下引物或者把引物沸水浴5min,在冰浴1min,试试看吧!希望有所帮助。
要科研也要生活
2楼2013-05-13 16:51:10
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wangxin320

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xuqingchun33(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,感谢你的慷慨解囊,期待你的精彩。 2013-05-14 11:02:35
重新设计一下引物吧,设计的时候看看软件上面显示出现dimer的情况,选择没有的就最好了
3楼2013-05-13 17:52:00
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叶伟伟99

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以换个KOD酶试试,
4楼2013-05-13 22:01:26
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