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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的片段连接T载体问题~
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xjtu0025

新虫 (小有名气)

[交流] 目的片段连接T载体问题~

求问,我PCR一段目的片段,是要做表达的.是完整的蛋白阅读框,有ATG.我打算连到T载体上面然后酶切再跟pET-32a连接.现在想问一下,因为我连T载体以后再酶切前后会多几个bp,选的是pMD-18T.用ECRO I 和HIND III切.这样会影响后续蛋白表达么?

另外我知道一定要注意不能引起阅读框的问题.我想问一下,这样酶连还是要去数阅读框有没有移么?
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1楼2013-05-09 23:22:26
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xjtu0025

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 李小冬 at 2013-05-11 13:26:33
需要测序的，表达是从个ATG还是的，如果多出的不是从ATG开始三的倍数，恰恰又有ATG，那就……

后来我去掉了我的片段的ATG...
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4楼2013-05-11 13:44:31
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beer胖

新虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xjtu0025(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-11 14:54:56
有ATG，多几个bp不会影响表达的
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2楼2013-05-10 14:18:23
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李小冬

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
xjtu0025(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2013-05-11 14:55:11
需要测序的，表达是从个ATG还是的，如果多出的不是从ATG开始三的倍数，恰恰又有ATG，那就……
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3楼2013-05-11 13:26:33
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