应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 两个基因片段的连接问题？
51/1返回列表
查看: 2392  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

xiaoxia110

木虫 (正式写手)

[求助] 两个基因片段的连接问题？ 已有1人参与

1 我要将两个基因片段A,B克隆到pcDNA载体上，请问我将这两个基因片段分别扩增，并使它们有一个酶切位点相同，然后分别酶切，再用T4连接酶将它们连接，形成A-B,这样是否可行？


2  如果可行的话，是不是将A,B,载体同时双酶切，然后混在一起，用T4连接酶连接，是否能得到所需要的重组载体？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-05-09 14:33:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoxia110

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-05-09 21:51:09
可行的, 这类三段连接的实验我做过, 和楼主提到过程一样的一样. 用前面回复你的虫友的方法也可以, 只是你需要额外订引物.

这样行的？引物不是两端都是羟基？扩增出来之后还是羟基，A和B两个扩增片段都是羟基，用T4连接酶可以连接吗？
你的引物没有进行磷酸化处理？就直接双酶切后混在一起？
赞一下 回复此楼
5楼2013-05-12 21:19:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
NovoRec®PCR一步定向克隆试剂盒

你看一下吧.不需要酶切位点.
赞一下 回复此楼
2楼2013-05-09 17:16:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangzhilai

金虫 (正式写手)
★
xiaoxia110(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 13:12:03
可以将A、B两端基因做个重叠延伸形成完整片段，再酶连
赞一下 回复此楼
3楼2013-05-09 21:12:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxia110(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2013-05-10 13:11:56
可行的, 这类三段连接的实验我做过, 和楼主提到过程一样的一样. 用前面回复你的虫友的方法也可以, 只是你需要额外订引物.
赞一下 回复此楼
4楼2013-05-09 21:51:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭