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为什么我的PCR那么多阳性?
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q317476148
铁杆木虫
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虫号: 1559925
[交流]
为什么我的PCR那么多阳性?
最近做PCR,标本为大鼠身上取的MSC和尾部成纤纤维细胞。然后用药处理培养,检测是否含一些心肌特异基因。大概检测了有五种基因。几乎处理和不处理的都一样,全阳性。虽然有时也做不出阳性,但重复一次后又出来阳性。按老板说i法没处理的应该没有目的条带。我也做过阴性对照,就是不加模版,阴性正常。总之,大部分情况下,他们都是阳性的。有怀疑过DNA污染,但我的片断都是跨内含子的啊。这是为什么。而且条带效果看上去还不错。细胞是同事分离加培养的,你们都郁闷做不出条带。可我随便做什么都有,大小也正好。这是什么原因啊?我要疯了。
[
Last edited by q317476148 on 2013-5-4 at 11:10
]
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2013-05-03 18:14:10
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q317476148
铁杆木虫
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引用回帖:
4楼
:
Originally posted by
Arrennew
at 2013-05-04 09:24:23
DNA功能验证实验反复失败(杂交),发现了质粒;
反义RNA实验反复失败,发现了miRNA;
全是诺贝尔奖啊!
稳定的,反常理的结果是可遇不可求的,我每天都在盼望着这种结果出现呢,
科研在圈外人看来本来就是变态 ...
不是我要疯自己,只是按老板的话说没处理的应该阴性,可它也阳。
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6楼
2013-05-04 11:12:21
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gzl9901
铁杆木虫
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祝福,祝福祝福,祝一切顺利!
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3楼
2013-05-03 21:32:20
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Arrennew
铁杆木虫
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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
q317476148(gyesang代发): 金币+1, 深刻!
2013-05-04 19:26:54
DNA功能验证实验反复失败(杂交),发现了质粒;
反义RNA实验反复失败,发现了miRNA;
全是诺贝尔奖啊!
稳定的,反常理的结果是可遇不可求的,我每天都在盼望着这种结果出现呢,
科研在圈外人看来本来就是变态的,但没人能预测你会不会中奖,换一种心态,何苦疯了自己?
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4楼
2013-05-04 09:24:23
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HTGe
金虫
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虫号: 2269996
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
首先声明,本人不是细胞专业,微生物专业;但,在任何科研实验中,对于问题的分析都是相通的;首先,PCR阳性,说明有目的条带,我们希望得到阴阳对照的结果;阴阳对照差异源自药物处理和引物的特异性;本人建议楼主复查以下两点:1、用于处理细胞的药物是否失效;2、PCR引物设计是否合理。
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5楼
2013-05-04 10:08:39
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