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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么我的PCR那么多阳性？
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 为什么我的PCR那么多阳性？

最近做PCR，标本为大鼠身上取的MSC和尾部成纤纤维细胞。然后用药处理培养，检测是否含一些心肌特异基因。大概检测了有五种基因。几乎处理和不处理的都一样，全阳性。虽然有时也做不出阳性，但重复一次后又出来阳性。按老板说i法没处理的应该没有目的条带。我也做过阴性对照，就是不加模版，阴性正常。总之，大部分情况下，他们都是阳性的。有怀疑过DNA污染，但我的片断都是跨内含子的啊。这是为什么。而且条带效果看上去还不错。细胞是同事分离加培养的，你们都郁闷做不出条带。可我随便做什么都有，大小也正好。这是什么原因啊？我要疯了。

[ Last edited by q317476148 on 2013-5-4 at 11:10 ]
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1楼 2013-05-03 18:14:10
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gzl9901

铁杆木虫 (文坛精英)
祝福，祝福祝福，祝一切顺利!
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3楼2013-05-03 21:32:20
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
q317476148(gyesang代发): 金币+1, 深刻！ 2013-05-04 19:26:54
DNA功能验证实验反复失败（杂交），发现了质粒；
反义RNA实验反复失败，发现了miRNA；
全是诺贝尔奖啊！
稳定的，反常理的结果是可遇不可求的，我每天都在盼望着这种结果出现呢，
科研在圈外人看来本来就是变态的，但没人能预测你会不会中奖，换一种心态，何苦疯了自己？
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4楼2013-05-04 09:24:23
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HTGe

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先声明，本人不是细胞专业，微生物专业；但，在任何科研实验中，对于问题的分析都是相通的；首先，PCR阳性，说明有目的条带，我们希望得到阴阳对照的结果；阴阳对照差异源自药物处理和引物的特异性；本人建议楼主复查以下两点：1、用于处理细胞的药物是否失效；2、PCR引物设计是否合理。
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5楼2013-05-04 10:08:39
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Arrennew at 2013-05-04 09:24:23
DNA功能验证实验反复失败（杂交），发现了质粒；
反义RNA实验反复失败，发现了miRNA；
全是诺贝尔奖啊！
稳定的，反常理的结果是可遇不可求的，我每天都在盼望着这种结果出现呢，
科研在圈外人看来本来就是变态 ...

不是我要疯自己，只是按老板的话说没处理的应该阴性，可它也阳。
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6楼2013-05-04 11:12:21
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137167741

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
换个人做一些，你在一边看着，不要动手，再看看~~
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7楼2013-05-04 13:50:26
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ccharlien

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看你的意思是用细胞做了逆转录然后普通PCR跑胶
1.细胞种类有问题或者这些基因和给药与否没关系
2.检测的所谓心肌特异基因并不是不给药就一点不表达，可能只是表达量的问题。你的PCR做了多少循环？要控制PCR的循环数来看量的差异，做个定量PCR确定一下更可靠；或者直接买个抗体做western看看。
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8楼2013-05-04 22:51:21
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damaomao

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
9楼2013-05-05 10:07:50
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简单回复
yingying15882楼
2013-05-03 21:13   回复  
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