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可乐7红茶

银虫 (正式写手)

[求助] 关于提取真菌DNA的方法 已有1人参与

最近打算做真菌的分子鉴定,首先要提DNA,但是上网查了一些资料,发现方法各有不同,不知道有没有做过的同学能推荐一个简单有效的方法。还有,不用液氮研磨行不行,能用其他代替吗?
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张小逸

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-05-03 17:25:58
我们实验室都是液氮研磨,试剂盒提取.


真菌细胞被不好破的哟.

请问你,使用的是什么试剂盒?蘑菇类真菌呢?谢谢
7楼2013-10-25 11:12:55
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liyu0355

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
可乐7红茶(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流经验! 2013-05-03 18:02:43
我们实验室都是液氮研磨,试剂盒提取.


真菌细胞被不好破的哟.
2楼2013-05-03 17:25:58
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可乐7红茶

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liyu0355 at 2013-05-03 17:25:58
我们实验室都是液氮研磨,试剂盒提取.


真菌细胞被不好破的哟.

没有试剂盒,打算用改良的CTAB法,有谁知道3% CTAB提取缓冲液怎么配制啊?
4楼2013-05-04 18:21:45
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樱落夕

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-29 16:41:42
gyesang: 回帖置顶 2013-10-29 16:42:08
1、CTAB提取缓冲液的经典配方
CTAB为十六烷基三甲基溴化铵, Tris-HCl (pH8.0)提供一个缓冲环境,防止核酸被破坏; EDTA螯合Mg2+或Mn2+离子,抑制DNase活性; NaCl 提供一个高盐环境,使DNP充分溶解,存在于液相中; Cβ-巯基乙醇是抗氧化剂,有效地防止酚氧化成醌,避免褐变,使酚容易去除基因组DNA。 CTAB        4g NaCl         16.364 g 1M Tris-HCl 20ml( PH8.0) 0.5M EDTA 8ml,先用70ml ddH2O溶解, 再定容至200ml
高温高压灭菌 提取时再加0.2-1% 2-巯基乙醇(400ul)或PVP 2g(1%)。
8楼2013-10-25 13:30:58
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