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consist10金虫 (正式写手)
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外源基因在SF9细胞内优化 mRNA二级结构调整 kozak序列
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在HPV 18野生型L1基因序列的基础上,截去C末端的32个氨基酸对应编码序列,统计出剩余序列中每种氨基酸的数目以及每种密码子的数目,依照sf9细胞密码子频率表中的比例来调整相应密码子的数目,使之与频率表相吻合;然后局部调整mRNA二级结构,降低其 复杂性;最后在基因起始密码子区域添加Kozak序列。基因优化后的序列由上海生物工程技术服务有限公司进行合成并通过EcoR I和Xba I酶切位点插入pFastBac1中,从而获得pFastBac1-HPV 18 L1重组质粒。 请教大家： 1. 依照sf9细胞密码子频率表中的比例来调整相应密码子的数目，是说按sf9密码子偏好型优化序列吗？我这样优化后起始密码子怎么是ATG，不应是AUG吗？ 2. 如何局部调整mRNA二级结构？用什么软件？怎么使用软件？ 3. 加入的kozak序列是GCCACC吗？是不是用来增强表达的？是必须加的吗？ 急需知道，先谢谢大家的赐教了。 |
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