应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达
52/1返回列表
查看: 1291  |  回复: 16
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

yingrong147

铁虫 (初入文坛)

[交流] 原核表达 已有8人参与

我有一个大小1000bp左右的基因与pET-28a连接后导入到BL21中，按1：
50的比例接种至含卡那的50ml LB中，28℃，200rpm，2h，OD达到0.7，加入IPTG至终浓度分别为：0.1、0.5、1mM诱导，继续培养1、2、6、9h后取样进行SDS-PAGE。都没有表达，可能有哪些原因。会不会跟IPTG放太久有关？
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2013-04-23 14:25:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingrong147

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by sc5921041 at 2013-04-24 04:33:11
Same problem bothers me for several months!!!!

15楼2013-04-25 15:05:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-23 20:43:21
载体的序列是否正确？跑的全菌总蛋白还是可溶蛋白？你指目标蛋白分子量附近没有诱导出特异条带吗？IPTG一般不会出什么问题，都是配好母液冻存在-20°C。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-23 14:37:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingrong147

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-04-23 14:37:01
载体的序列是否正确？跑的全菌总蛋白还是可溶蛋白？你指目标蛋白分子量附近没有诱导出特异条带吗？IPTG一般不会出什么问题，都是配好母液冻存在-20°C。

序列是正确的，全菌总蛋白，没有特异条带。
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-23 15:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuding6

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香。期待你的慷慨解囊。快乐每一天鼓励虫子来到生物版块交流，期待你的精彩1 2013-04-23 20:43:31
要证明是不是IPTG的问题就得做个阳性对照，如果IPTG没问题，那就换载体换宿主试试。
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-23 19:38:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 17 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭