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sillyange

捐助贵宾 (初入文坛)

[求助] 帮我一个学医的朋友求助一下,酶联免疫吸附实验进行血清封闭抗体的检测的具体操作方法

RT,她刚研一,还不怎么会操作小木虫,在此求助各位学医的同僚,希望能得到帮助,感激不尽!
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主问的是ELISA法检测血清中的抗体吧?ELISA试剂盒说明书上有具体的操作步骤,照着做就行了。一般检测抗体的试剂盒使用的是双抗原夹心法。大概步骤如下:用纯化的人封闭抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入封闭抗体(BA),再与HRP标记的人封闭抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的封闭抗体(BA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人封闭抗体(BA)浓度。
实验,实验,还是实验!
3楼2013-04-20 01:25:58
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侯伯杨

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sillyange(缩++影代发): 金币+3, 谢谢应助 2013-04-19 18:08:52
将硝酸纤维素膜置于封闭液中,37℃感作15-30分钟。封闭液多采用含有正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。


加被检血清 可直接在抗原圈上加,也可剪下抗原圈、置于微量板孔中,再加入一定量适度稀释的待检血清,37℃反应一定时间,用洗涤液洗三次,每次1-3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。
没个性....
2楼2013-04-18 22:36:46
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