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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 医学 » 检验 » 帮我一个学医的朋友求助一下，酶联免疫吸附实验进行血清封闭抗体的检测的具体操作方法
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sillyange

捐助贵宾 (初入文坛)

[求助] 帮我一个学医的朋友求助一下，酶联免疫吸附实验进行血清封闭抗体的检测的具体操作方法

RT，她刚研一，还不怎么会操作小木虫，在此求助各位学医的同僚，希望能得到帮助，感激不尽！
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1楼 2013-04-18 22:25:23
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ujsyangyong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主问的是ELISA法检测血清中的抗体吧？ELISA试剂盒说明书上有具体的操作步骤，照着做就行了。一般检测抗体的试剂盒使用的是双抗原夹心法。大概步骤如下：用纯化的人封闭抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被单抗的微孔中依次加入封闭抗体（BA），再与HRP标记的人封闭抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的封闭抗体（BA）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人封闭抗体（BA）浓度。
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实验，实验，还是实验！
3楼2013-04-20 01:25:58
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侯伯杨

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
sillyange(缩++影代发): 金币+3, 谢谢应助 2013-04-19 18:08:52
将硝酸纤维素膜置于封闭液中，37℃感作15－30分钟。封闭液多采用含有正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。


加被检血清　可直接在抗原圈上加，也可剪下抗原圈、置于微量板孔中，再加入一定量适度稀释的待检血清，37℃反应一定时间，用洗涤液洗三次，每次1－3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。
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没个性....
2楼2013-04-18 22:36:46
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