| 查看: 2802 | 回复: 12 | |||||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||||
[求助]
荧光pcr阴性对照有扩增 已有2人参与
|
|||||
|
最近在做荧光pcr，阴性对照老是有扩增，刚开始以为是引物污染了，就用新的引物，结果还是有扩增；以为是水有问题，就用买的dd水，还是有扩增，这回就剩没换mix了，我这样排除对吗？为森马阴性对照会有扩增呢？ 请各位大侠帮帮忙，跪谢啊 |
回复此楼» 猜你喜欢
梦想
已经有8人回复
-
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有19人回复
-
面上合作单位盖章
已经有9人回复
-
面上函评意见出来了，像什么等级？
已经有17人回复
-
为什么国自然不能直接公布
已经有5人回复
-
学科评审组评审是指会评吗？
已经有4人回复
-
为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难
已经有14人回复
-
小白求助 投论文要求的highlights应该如何写
已经有4人回复
-
麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上）
已经有12人回复
-
怎么看青基中了没有啊
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 荧光定量PCR扩增效率低
已经有16人回复
- 荧光定量PCR设计了三对引物了，都扩增不出来，郁闷啊
已经有4人回复
- 荧光PCR阴性对照存在污染
已经有18人回复
- qPCR空白有荧光信号，无法去除
已经有7人回复
- 有做过荧光定量PCR的吗？
已经有9人回复
- 求解：实时荧光定量PCR奇峰
已经有18人回复
- 求解：Taqman MGB实时荧光定量PCR空白对照组荧光信号很强怎么回事？
已经有10人回复
- 荧光定量PCR
已经有12人回复
- 荧光定量PCR的扩增曲线很奇怪，什么原因
已经有7人回复
- 荧光PCR中，荧光阀值的问题
已经有11人回复
- 荧光定量PCR扩增效率怎么做？？？？我要被逼疯了
已经有17人回复
- 求助！关于RT-PCR的问题！
已经有20人回复
- 荧光定量PCR与普通PCR产物不一样？
已经有6人回复
- PCR阴性对照假阳性问题
已经有25人回复
- 【求助/交流】PCR空白污染
已经有11人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr出现直线扩增曲线，求指导
已经有5人回复
- 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
已经有18人回复
- 【求助/交流】Real time PCR 熔点曲线求助，谢谢
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR产物电泳检测
已经有20人回复
- 【求助/交流】PCR阴性对照总有扩增产物 都有哪些可能？
已经有6人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（二）
已经有12人回复
- 【分享】荧光定量PCR实验指南（一）
已经有20人回复
- 【求助/交流】荧光定量pcr
已经有11人回复
凌波丽
专家顾问 (知名作家)
-
专家经验: +218 - 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.044
- 金币: 2119.9
- 散金: 10
- 红花: 209
- 帖子: 5633
- 在线: 571.6小时
- 虫号: 1766465
- 注册: 2012-04-19
- 性别: MM
- 专业: 生物大分子结构与功能
- 管辖: 生物科学综合
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题 2013-04-24 08:58:28
感谢参与，应助指数 +1
zhang8826857: 金币+5, 鼓励积极发帖帮助解答问题 2013-04-24 08:58:28
|
可能是出现了非特异性扩增带。 PCR扩增后出现的条带与预计的大小不一致，或大或小，或者同时出现特异性扩增带 与非特异性扩增带。 非特异性条带的出现，其原因：一是引物与靶序列不完全互补、 或引物聚合形成二聚体。二是Mg2+离子浓度过高（大于10mmol/L)、退火温度过低，及PCR循环次数过多（超过30次循环）有关。 其次是酶的质和量，往往一些来源的酶易出现非特异条带而另一来源的酶 则不出现，酶量过多有时也会出现非特异性扩增。 其对策有：必要时重新设计引 物。减低酶量或调换另一来源的酶。降低引物量，适当增加模板量，减少循环次 数。适当提高退火温度或采用二温度点法(93℃变性，65℃左右退火与延伸)。 再有是：模板(靶基因)核酸的量与纯化程度。模板核酸的量与纯化程度，是PCR成败与否的关键环节之一，传统的DNA纯化方法通常采用SDS和蛋白酶K来消化处理标本。SDS的主要功能是： 溶解细胞膜上的脂类与蛋白质，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜，并解离细胞中的核蛋白，SDS 还能与蛋白质结合而沉淀； 蛋白酶K能水解消化蛋白质，特别是与DNA结合的组蛋白，再用有机溶剂酚与氯仿抽提掉蛋白质和其它细胞组份，用乙醇或异丙醇沉淀核酸。提取的核酸即可作为模板用于PCR反应。一般临床检测标本，可采用快速简便的方法溶解细胞，裂解病原体，消化除去染色体的蛋白质使靶基因游离，直接用于PCR扩增。RNA模板提取一般采用异硫氰酸胍或蛋白酶K法，要防止RNase降解RNA。 |
5楼2013-04-19 17:57:52
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MicEPI: 1
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
2楼2013-04-19 05:46:29
qqxs
木虫 (正式写手)
- 应助: 61 (初中生)
- 金币: 3933.3
- 散金: 1003
- 红花: 4
- 帖子: 337
- 在线: 40.8小时
- 虫号: 1108858
- 注册: 2010-09-27
- 性别: MM
- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2013-04-19 12:33:09
4楼2013-04-19 16:24:23
投票:
5