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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 药物对细胞毒性的实验方法
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小二芹

新虫 (小有名气)

[求助] 药物对细胞毒性的实验方法 已有1人参与

请问一下，有木有人做药物对细胞毒性方面的实验，都用的什么方法啊？？？
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1楼 2013-04-18 21:25:59
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bunny0512

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-20 08:15:41
唔？不是都用MTT么？promega有成品试剂盒
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在哪里~在哪里见过你~
2楼2013-04-19 09:53:03
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小二芹

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by bunny0512 at 2013-04-19 09:53:03
唔？不是都用MTT么？promega有成品试剂盒

我们也是用MTT呢，可是总觉得重现性不好呢。。。做一次一个数据。。。。这是啥问题啊。。。。请教啊。。。。
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3楼2013-04-19 14:31:39
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LingerMM

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分享经验 2013-04-20 08:16:15
silicare: 金币+5, BioEPI+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-04-20 08:20:19
我用过MTT，WST-1，Cell Titer，前两个是检测线粒体酶活性，是测吸光度的，最后一个检测ATP含量，测的是化学发光。如果你的药对光有干扰，可以综合两种方法来测
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4楼2013-04-19 17:09:04
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小二芹

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by LingerMM at 2013-04-19 17:09:04
我用过MTT，WST-1，Cell Titer，前两个是检测线粒体酶活性，是测吸光度的，最后一个检测ATP含量，测的是化学发光。如果你的药对光有干扰，可以综合两种方法来测

好的 谢谢啊 不过顺便请教一下，做MTT方法的时候，细胞加药的时候，用不用把原来的培养基吸出来啊，感觉吸出来有时候会碰到孔底的细胞，造成人为死亡呢。。。。。
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5楼2013-04-22 09:34:28
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LingerMM

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小二芹 at 2013-04-22 09:34:28
好的 谢谢啊 不过顺便请教一下，做MTT方法的时候，细胞加药的时候，用不用把原来的培养基吸出来啊，感觉吸出来有时候会碰到孔底的细胞，造成人为死亡呢。。。。。...

最好吸出来，你的药物也许会对MTT的检测造成干扰，吸的时候小心点就行了
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6楼2013-04-22 16:25:29
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小二芹

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by LingerMM at 2013-04-22 16:25:29
最好吸出来，你的药物也许会对MTT的检测造成干扰，吸的时候小心点就行了...

不是啊不是啊。。。。不是要先加100μL的细胞嘛，然后再加入含有不同浓度的药的培养基，就是再加含药培养基的时候，以前加的那个100μL的培养基用不用吸出来啊。。。。。。
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7楼2013-04-22 17:01:00
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LingerMM

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 小二芹 at 2013-04-22 17:01:00
不是啊不是啊。。。。不是要先加100μL的细胞嘛，然后再加入含有不同浓度的药的培养基，就是再加含药培养基的时候，以前加的那个100μL的培养基用不用吸出来啊。。。。。。...

96孔板，每个孔加100μL细胞悬液，板的最外一圈不要用，要加PBS或者培养基防止靠外的孔溶液蒸发。注意细胞密度不能太大或者太小，否则测出来不准（可以之前先做个细胞浓度的试验确定下最适合的细胞密度）。细胞悬液先贴壁培养24小时，然后把培养基吸出，加入含药物的培养基，还要设置control，就是培养基中只加你的药物的溶剂。测量的时候要设置空白，空白就是没有细胞和药物，只有培养基和试剂
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8楼2013-04-23 09:00:59
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小二芹

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by LingerMM at 2013-04-23 09:00:59
96孔板，每个孔加100μL细胞悬液，板的最外一圈不要用，要加PBS或者培养基防止靠外的孔溶液蒸发。注意细胞密度不能太大或者太小，否则测出来不准（可以之前先做个细胞浓度的试验确定下最适合的细胞密度）。细胞悬液 ...

多谢啊。。。不过假如MTT 4h后，形成的甲瓒不溶于水，所以我们都吸出来，就不用设置不含细胞的空白了。。。。。
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9楼2013-04-24 09:53:17
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gyfwxy823

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 小二芹 at 2013-04-22 17:01:00
不是啊不是啊。。。。不是要先加100μL的细胞嘛，然后再加入含有不同浓度的药的培养基，就是再加含药培养基的时候，以前加的那个100μL的培养基用不用吸出来啊。。。。。。...

用啊  把旧的培养基全部吸出来，然后加入含有药物的培养基，24h后加入MTT试剂，一定要多做空白，如果药物与MTT反应的话，可以吸出含有药物的培养基，加入不含药物只含MTT的培养基
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10楼2015-01-04 22:21:05
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