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海王之心2751

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

我用的分离胶15%,浓缩胶5%,前一天配胶,第二天跑电泳,第二天拔出梳子时,发现浓缩胶会缩短,上样槽缩短一半,导致不能上足够的样,浓缩胶有灌满。请问我的浓缩胶为什么会收缩这么严重?
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gchjason

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 飞飞050227 at 2013-05-01 15:55:44
啊?第一天制完的胶第二天跑会有什么影响呢?我每次都是这样干的……不知道实验不顺利是不是这个原因造成的,但是染胶后条带很清楚锐利啊,不是说制完胶最好要充分聚合之后再跑么。...

充分聚合时间最多也就1个小时左右吧,因为胶的聚合快慢是有要求的,这跟你加的AP和TEMED的量有关,浓缩胶最适合的聚合速度是加完AP和TEMED后8~10分钟开始聚合,按你这么说要一晚上时间来聚合,那你的胶的聚合速度肯定是太慢了。一般环境温度适合的话半个小时就能聚合完全了。我们的经验都是胶制备好后20~40分钟内使用最合适,时间久了感觉胶就不好了,具体什么不好说不太清楚。又一次因为时间来不及头天晚上制备的胶,第二天跑,结果就失败了。后来就都是每次跑之前制备。
Keep your friends close,but keep your enemies closer.
11楼2013-05-02 12:57:10
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gchjason

铁虫 (小有名气)


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-21 09:50:59
浓缩胶在凝固的时候以及放在冰箱中保存的时候都会收缩的。我做的时候一般都是在浓缩胶凝固时一直盯着,看少了就补加,直到完全凝固好。另外不建议第一天做胶,第二天用,这样常会出现很多问题,胶的质量会不好。我一般都是做完胶直接就跑。
Keep your friends close,but keep your enemies closer.
2楼2013-04-17 11:45:28
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-21 09:51:08
做了个胶放了一天慢就很明显的收缩了,应该是时间有点久了,一般做胶都是头天晚上做好,第二天一来就开始用,感觉没什么问题~
一花一世界、一叶一菩提
3楼2013-04-17 11:53:53
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ptzhyding06

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-21 09:51:17
那个你前一天做完胶之后是怎么保存的呢,一般都是要保持湿润的吧 我自己做的有时候放在塑料手套里面加点缓冲溶液放4度之后2-4天之后都可以用的
4楼2013-04-17 13:26:09
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