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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳
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海王之心2751

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳

我用的分离胶15%，浓缩胶5%，前一天配胶，第二天跑电泳，第二天拔出梳子时，发现浓缩胶会缩短，上样槽缩短一半，导致不能上足够的样，浓缩胶有灌满。请问我的浓缩胶为什么会收缩这么严重？
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为梦想努力拼搏！
1楼 2013-04-17 11:16:01
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gchjason

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 飞飞050227 at 2013-05-01 15:55:44
啊？第一天制完的胶第二天跑会有什么影响呢？我每次都是这样干的……不知道实验不顺利是不是这个原因造成的，但是染胶后条带很清楚锐利啊，不是说制完胶最好要充分聚合之后再跑么。...

充分聚合时间最多也就1个小时左右吧，因为胶的聚合快慢是有要求的，这跟你加的AP和TEMED的量有关，浓缩胶最适合的聚合速度是加完AP和TEMED后8~10分钟开始聚合，按你这么说要一晚上时间来聚合，那你的胶的聚合速度肯定是太慢了。一般环境温度适合的话半个小时就能聚合完全了。我们的经验都是胶制备好后20~40分钟内使用最合适，时间久了感觉胶就不好了，具体什么不好说不太清楚。又一次因为时间来不及头天晚上制备的胶，第二天跑，结果就失败了。后来就都是每次跑之前制备。
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11楼2013-05-02 12:57:10
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gchjason

铁虫 (小有名气)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-21 09:50:59
浓缩胶在凝固的时候以及放在冰箱中保存的时候都会收缩的。我做的时候一般都是在浓缩胶凝固时一直盯着，看少了就补加，直到完全凝固好。另外不建议第一天做胶，第二天用，这样常会出现很多问题，胶的质量会不好。我一般都是做完胶直接就跑。
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2楼2013-04-17 11:45:28
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-21 09:51:08
做了个胶放了一天慢就很明显的收缩了，应该是时间有点久了，一般做胶都是头天晚上做好，第二天一来就开始用，感觉没什么问题~
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一花一世界、一叶一菩提
3楼2013-04-17 11:53:53
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ptzhyding06

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-21 09:51:17
那个你前一天做完胶之后是怎么保存的呢，一般都是要保持湿润的吧 我自己做的有时候放在塑料手套里面加点缓冲溶液放4度之后2-4天之后都可以用的
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4楼2013-04-17 13:26:09
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