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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 资料求助 » 液相梯度洗脱时流动相梯度变化速度与出峰时间的关系
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无聊先森

银虫 (小有名气)

[求助] 液相梯度洗脱时流动相梯度变化速度与出峰时间的关系

反相时使用梯度洗脱，流动相的梯度变化速度和出峰时间有什么关系吗？为什么我计算出来的在相应流动相浓度下并没有出现该出现的峰呢？
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1楼 2013-04-15 22:06:06
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无聊先森

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by feng100381 at 2013-04-16 13:51:20
什么意思？第一次梯度洗，然后根据出峰时的乙腈浓度，再用这一浓度的流动相洗脱是吗？还是第二次依然是线性梯度，只不过缩小了时间和乙腈的终浓度百分比？...

我是根据出峰时的乙腈浓度来设置梯度的，想让出峰时间很近的两个峰分离，就根据他们的乙腈浓度设置中间停留时间（相同浓度停留时间）。我觉得这样应该能够分离的，可实际上完全不行，为什么呢？请问我这样做不行么？
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8楼2013-04-16 16:23:11
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duliuhui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流，欢迎常来哦。 2013-04-16 08:47:05
梯度变化与保留时间当然有关系了，反相上如C18柱一般按极性大小顺序洗脱，极性越小保留越大。另外填料类型、流动相pH都对保留有较大影响。
梯度变化速度快，相应出峰会更早。不知楼主是如何计算出峰时间的？
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2楼2013-04-15 22:46:08
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456895

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
3楼2013-04-16 10:34:21
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feng100381

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主怎么计算的？
你看到流动相入口处到了你计算的浓度，柱子里再到你需要的浓度是有延迟的。
即使到了相应的浓度，流动相和样品也要有相互作用的过程。
梯度洗脱靠计算来估计保留时间比较困难。
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蛋白
4楼2013-04-16 10:59:51
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