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无聊先森

银虫 (小有名气)

[求助] 液相梯度洗脱时流动相梯度变化速度与出峰时间的关系

反相时使用梯度洗脱,流动相的梯度变化速度和出峰时间有什么关系吗?为什么我计算出来的在相应流动相浓度下并没有出现该出现的峰呢?
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无聊先森

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by feng100381 at 2013-04-16 13:51:20
什么意思?第一次梯度洗,然后根据出峰时的乙腈浓度,再用这一浓度的流动相洗脱是吗?还是第二次依然是线性梯度,只不过缩小了时间和乙腈的终浓度百分比?...

我是根据出峰时的乙腈浓度来设置梯度的,想让出峰时间很近的两个峰分离,就根据他们的乙腈浓度设置中间停留时间(相同浓度停留时间)。我觉得这样应该能够分离的,可实际上完全不行,为什么呢?请问我这样做不行么?
8楼2013-04-16 16:23:11
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查看全部 18 个回答

duliuhui

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
痴夷子皮: 金币+1, 谢谢交流,欢迎常来哦。 2013-04-16 08:47:05
梯度变化与保留时间当然有关系了,反相上如C18柱一般按极性大小顺序洗脱,极性越小保留越大。另外填料类型、流动相pH都对保留有较大影响。
梯度变化速度快,相应出峰会更早。不知楼主是如何计算出峰时间的?
2楼2013-04-15 22:46:08
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456895

禁虫 (正式写手)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

3楼2013-04-16 10:34:21
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feng100381

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主怎么计算的?
你看到流动相入口处到了你计算的浓度,柱子里再到你需要的浓度是有延迟的。
即使到了相应的浓度,流动相和样品也要有相互作用的过程。
梯度洗脱靠计算来估计保留时间比较困难。
蛋白
4楼2013-04-16 10:59:51
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