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jiangyinshen

木虫 (著名写手)

[求助] SDS-PAGE蛋白Marker总是歪掉,有图为证,请高手指教

求助各位高手,SDS-PAGE电泳结果总是这种样子,已经连续五次这样了,去离子水新制备的,pH8.8和pH6.8的Tris-HCl都是春节后订的,SDS和APS也是现配的,TEMED新订的,只有30%Arc-Bis是去年的,这些试剂中该放4度的都一直放在4度,我想不通到底是哪里出了问题,会不会是30%Arc-Bis过期了,请各位高手不吝指教,谢谢!

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不是風動,亦非幡動,仁者心動
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真行刘

银虫 (小有名气)

我说的胶没有问题原因有:
1.配制胶的时候你肯定是混匀了的,很少出现胶配制不均匀的情况。
2配制胶的过程中给胶一段时间让其凝固是很有必要的。我们一般会在下层胶配制40min后再配制上层胶,上层胶配制后放置至少1.54h之后再上样。
16楼2013-04-24 09:59:25
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DBWJ

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yqbter: 金币+10, 传说中的处女贴,奖励是必须的! 2013-04-15 17:14:52
我也不是特别的会,提一下小建议1.电泳液要是旧的话配点新的看下。2.丙烯酰胺储液换个新的看下。3.电压要是太高的话调低点看看。80V浓缩120分离看下。胶的浓度换个和MAKER要求一样的看下
2楼2013-04-15 16:57:04
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chinatiger

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-16 07:21:54
jiangyinshen: 金币+2, 有帮助 2013-04-17 15:40:11
主要还是凝胶均一性不好,缓冲液最好新鲜配置
3楼2013-04-16 00:03:06
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-16 07:22:13
很多商品化的marker已经经过处理了,可以直接上样跑。但是公司处理marker的溶液往往与实验室自己配置的不同。所以处理好的marker需要稀释到上样缓冲液里。此外空白泳道不要什么都不点,需要上同体积的上样缓冲液保持平衡。
4楼2013-04-16 04:07:17
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