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3`RACE求助！十分诡异！~~~~~~~~~~求大神指点
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| 3·RACE做出来之后 有三条带 一条1500bp左右的条带 下面有300bp拖尾 然后我采取胶回收 回收了好多次终于成功回收了1500bp的带（但是条带很浅）连接转化 长了白斑 摇菌 菌液PCR 这时候神奇的事情发生了 没有1500的带 只有300的带 我想死！！ 真的很诡异 求大神解释帮助！ |
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yujitianqing
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5楼2013-04-16 08:58:44
hellolin
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2楼2013-04-14 22:37:26
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【答案】应助回帖
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yoyo单眼皮: 金币+4 2013-04-16 14:30:15
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-29 14:37:34
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呵呵，结果没出来就想死，可是，死了以后还是不出来。 实验重现：你的PCR结果有三条带，目标是1500bp，有300bp的拖尾杂带，还有一条没说。 1500bp的目标条带，回收了好几次才回收到了。连转长白班，菌液PCR 却出现了300bp的条带。 个人认为：你的回收1500bp的产物中有300bp的杂带。也许很少，你在胶图上无法看见。只见1500bp的条带了。 容易理解的是：300bp的条带，对比起1500bp的条带，连接的效率要高很多。 解决：个人建议，从PCR这步控制，提高PCR产物的特异性。包括模板的制备，引物的设计，循环的设计，酶的选用，等等。目标是拿到单一的目标条带。便与下游的回收和连接操作了。有了这样的上游实验作为保证，也许出来的菌液PCR 的结果就不一样了。加油！！！ |
4楼2013-04-16 01:14:08