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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bb123456789

金虫 (正式写手)

[求助] 最近准备测酶活,遇到了一些问题,请各位大侠指点!

我正在研究一个水解酶的功能。原核表达已拿到纯化的目的蛋白,看了一下文献选择了一个底物。目前想测酶活却遇到了几个问题,如下:
1、测酶活前要不要透析目的蛋白呢?
2、底物可溶解在二甲基亚砜里,可是加到磷酸盐缓冲液中又不溶了,该怎么办呢?
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by bb123456789 at 2013-04-24 20:30:52
你溶剂不是用的纯DMSO吗?...

溶剂是纯的DMSO,但是反应是在磷酸缓冲液中进行的哦,我把底物在DMSO中溶解后加入到含细胞的磷酸缓冲液体系进行反应的。我尝试加了点吐温80,有点改善了。
9楼2013-04-30 18:59:19
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)

我也遇到了同样的问题,底物只溶于二甲亚砜,但一进入磷酸缓冲液就析出来了,导致取样不均匀,无法计算酶活。同样求指点!
2楼2013-04-14 14:19:36
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bb123456789

金虫 (正式写手)

同命相连呀  我现在正在摸索条件,换了缓冲液  如果可以的话,到时候告诉你  请你的底物是什么呢?
坚持是一个过程,不是理所当然地抱怨和放弃
3楼2013-04-15 16:37:49
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)


pzypdl: 金币+1, 谢谢回帖 2013-04-22 21:04:21
我的底物是N-苄氧羰基-  3-氨基丙醛,现在正在尝试加大DMSO的量或者换其他的助溶剂,不知道行不行。而且我用的是细胞催化 ,酶在胞内。
4楼2013-04-22 13:00:33
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