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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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bb123456789

实习版主

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[求助] 最近准备测酶活,遇到了一些问题,请各位大侠指点!

我正在研究一个水解酶的功能。原核表达已拿到纯化的目的蛋白,看了一下文献选择了一个底物。目前想测酶活却遇到了几个问题,如下:
1、测酶活前要不要透析目的蛋白呢?
2、底物可溶解在二甲基亚砜里,可是加到磷酸盐缓冲液中又不溶了,该怎么办呢?
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五水合硫酸铜

版主

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引用回帖:
5楼: Originally posted by soloaaaa at 2013-04-22 15:35:47
不用透析
底物析出来也能反应,就是需要全部萃取

底物析出来会使取样不均匀,我的实验结果显示底物的含量没有随着时间的推移而减少,这样就没法计算酶活了。
6楼2013-04-22 18:50:43
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五水合硫酸铜

管理员

优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!优秀!!有木有!!!

我也遇到了同样的问题,底物只溶于二甲亚砜,但一进入磷酸缓冲液就析出来了,导致取样不均匀,无法计算酶活。同样求指点!
2楼2013-04-14 14:19:36
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bb123456789

主管区长

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同命相连呀  我现在正在摸索条件,换了缓冲液  如果可以的话,到时候告诉你  请你的底物是什么呢?
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3楼2013-04-15 16:37:49
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五水合硫酸铜

实习版主

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pzypdl: 金币+1, 谢谢回帖 2013-04-22 21:04:21
我的底物是N-苄氧羰基-  3-氨基丙醛,现在正在尝试加大DMSO的量或者换其他的助溶剂,不知道行不行。而且我用的是细胞催化 ,酶在胞内。
4楼2013-04-22 13:00:33
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