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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 催化 » 催化反应 » 最近准备测酶活，遇到了一些问题，请各位大侠指点！
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bb123456789

金虫 (正式写手)

[求助] 最近准备测酶活，遇到了一些问题，请各位大侠指点！

我正在研究一个水解酶的功能。原核表达已拿到纯化的目的蛋白，看了一下文献选择了一个底物。目前想测酶活却遇到了几个问题，如下：
1、测酶活前要不要透析目的蛋白呢？
2、底物可溶解在二甲基亚砜里，可是加到磷酸盐缓冲液中又不溶了，该怎么办呢？
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坚持是一个过程，不是理所当然地抱怨和放弃
1楼2013-04-10 19:18:59
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)
我也遇到了同样的问题，底物只溶于二甲亚砜，但一进入磷酸缓冲液就析出来了，导致取样不均匀，无法计算酶活。同样求指点！
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2楼2013-04-14 14:19:36
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bb123456789

金虫 (正式写手)
同命相连呀  我现在正在摸索条件，换了缓冲液  如果可以的话，到时候告诉你  请你的底物是什么呢？
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坚持是一个过程，不是理所当然地抱怨和放弃
3楼2013-04-15 16:37:49
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)
★
pzypdl: 金币+1, 谢谢回帖 2013-04-22 21:04:21
我的底物是N-苄氧羰基-  3-氨基丙醛，现在正在尝试加大DMSO的量或者换其他的助溶剂，不知道行不行。而且我用的是细胞催化 ，酶在胞内。
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4楼2013-04-22 13:00:33
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soloaaaa

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
pzypdl: 金币+1, 谢谢回帖 2013-04-22 21:04:26
不用透析
底物析出来也能反应，就是需要全部萃取
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5楼2013-04-22 15:35:47
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by soloaaaa at 2013-04-22 15:35:47
不用透析
底物析出来也能反应，就是需要全部萃取

底物析出来会使取样不均匀，我的实验结果显示底物的含量没有随着时间的推移而减少，这样就没法计算酶活了。
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6楼2013-04-22 18:50:43
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bb123456789

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 五水合硫酸铜 at 2013-04-22 13:00:33
我的底物是N-苄氧羰基-  3-氨基丙醛，现在正在尝试加大DMSO的量或者换其他的助溶剂，不知道行不行。而且我用的是细胞催化 ，酶在胞内。

你溶剂不是用的纯DMSO吗？
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坚持是一个过程，不是理所当然地抱怨和放弃
7楼2013-04-24 20:30:52
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readytogo

荣誉版主 (文学泰斗)

瓜帅-催化剂

优秀区长优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
missu001: 金币+1, 感谢提示 2013-04-24 22:10:30
http://muchong.com/html/201109/3551015.html
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才须学也，非学无以广才，非志无以成学。【科研生活区】、【碳一化工】（煤、天然气化工）欢迎您常来交流
8楼2013-04-24 21:06:12
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五水合硫酸铜

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by bb123456789 at 2013-04-24 20:30:52
你溶剂不是用的纯DMSO吗？...

溶剂是纯的DMSO，但是反应是在磷酸缓冲液中进行的哦，我把底物在DMSO中溶解后加入到含细胞的磷酸缓冲液体系进行反应的。我尝试加了点吐温80，有点改善了。
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9楼2013-04-30 18:59:19
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bb123456789

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 五水合硫酸铜 at 2013-04-30 18:59:19
溶剂是纯的DMSO，但是反应是在磷酸缓冲液中进行的哦，我把底物在DMSO中溶解后加入到含细胞的磷酸缓冲液体系进行反应的。我尝试加了点吐温80，有点改善了。...

哦  这样子呀   我也试试  
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坚持是一个过程，不是理所当然地抱怨和放弃
10楼2013-05-01 17:28:03
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