应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 基因克隆转化表达遇到问题，求大神解答
51/1返回列表
查看: 1759  |  回复: 14
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

echochen1017

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆转化表达遇到问题，求大神解答

最近在做基因克隆转化的实验，目的基因与pET28B质粒用T4连接酶连接过夜，后转入感受态BL21(DE3)中，涂平板（抗性筛选），反复3次，均未有菌落出现，求分析原因！急求！！谢帮助！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

宝贝里

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-04-09 14:28:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

echochen1017

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jiachd2010 at 2013-04-11 23:06:25
首先你得方案没有错误，每一步的试剂、材料及加量等都正确，然后没做一步都跑一下电泳，作对照，最后看哪一步有问题就再找原因
酶切质粒的时候有没有把抗性基因给破坏，引物的设计是否准确等都要验证啊

谢谢~~突变已经成功，并测序没问题，就想连到表达载体上表达
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-27 11:14:24
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

守好我的道

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-10 07:11:05
echochen1017: 金币+1 2013-04-27 21:28:17
silicare: BioEPI+1 2013-04-28 09:56:58
做个实验对照。个人认为可以这样设计：首先用你所用的pET28B，直接转化，涂板。长斑正常，说明你用的平板，感受态细胞和转化的操作没有问题。其次再验证你的酶切和连接有没有问题。一个一个的验证，实验做不出来，总是有原因的。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-10 02:03:11
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

carlisle612

新虫 (初入文坛)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-12 05:50:34
会不会是感受态的问题~没有一个菌落出现嘛？建议先换个感受态试一下   28a是卡那抗性噢，上次我粗心大意加了氨苄~注意小细节~楼主加油噢！
赞一下 回复此楼
天下乌鸦一般黑
3楼2013-04-10 11:39:08
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haoziying

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
wizardfan: 金币+2, 说得有道理 2013-04-12 05:51:06
楼主说的不是很详细。
比如连接连接片段的大小等等，当然2楼说的比较详细。自己设计对照试验一一排除。
你做了三次没连上，我曾经一个多月一个也没有连上。但是经过这一个月的练习，后来基本上每次都能连上。
还是要多做，才能熟能生巧。
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-10 18:10:53
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭