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echochen1017

新虫 (初入文坛)

[求助] 基因克隆转化表达遇到问题,求大神解答

最近在做基因克隆转化的实验,目的基因与pET28B质粒用T4连接酶连接过夜,后转入感受态BL21(DE3)中,涂平板(抗性筛选),反复3次,均未有菌落出现,求分析原因!急求!!谢帮助!!
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haoziying

至尊木虫 (职业作家)

★ ★
wizardfan: 金币+2, 说得有道理 2013-04-12 05:51:06
楼主说的不是很详细。
比如连接连接片段的大小等等,当然2楼说的比较详细。自己设计对照试验一一排除。
你做了三次没连上,我曾经一个多月一个也没有连上。但是经过这一个月的练习,后来基本上每次都能连上。
还是要多做,才能熟能生巧。
4楼2013-04-10 18:10:53
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守好我的道

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+3, 谢谢分析 2013-04-10 07:11:05
echochen1017: 金币+1 2013-04-27 21:28:17
silicare: BioEPI+1 2013-04-28 09:56:58
做个实验对照。个人认为可以这样设计:首先用你所用的pET28B,直接转化,涂板。长斑正常,说明你用的平板,感受态细胞和转化的操作没有问题。其次再验证你的酶切和连接有没有问题。一个一个的验证,实验做不出来,总是有原因的。
2楼2013-04-10 02:03:11
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carlisle612

新虫 (初入文坛)

★ ★
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-04-12 05:50:34
会不会是感受态的问题~没有一个菌落出现嘛?建议先换个感受态试一下   28a是卡那抗性噢,上次我粗心大意加了氨苄~注意小细节~楼主加油噢!
天下乌鸦一般黑
3楼2013-04-10 11:39:08
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daodoudou

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+1, 谢谢参与 2013-04-12 05:51:18
一般是感受态的问题
5楼2013-04-11 16:30:05
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