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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help
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gissingtan

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help

最近在做巢式PCR，请问有经验的师兄师姐，你们第一次PCR的产物需要做什么处理才作为第二次PCR的模板？
我听师姐说直接切胶，放-20℃过夜，12000rpm离心10min，取上清液做模板，不知是否合理，我自己尝试了一下，跑胶检测没有条带。
我想请教：
1、第一次PCR产物是怎么处理，再作为第二次PCR的模板
2、我做的方法是否正确，如果正确，为什么检测没有条带
谢谢大家了
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1楼 2013-04-07 15:52:54
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czfscf

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一次pcr产物少量经过电泳检测扩出来了就行，然后直接再拿这个做模板扩下一个
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Ecological Genomics；the scientific walking hormone
5楼2013-04-07 20:35:21
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zhangquan084

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
最近正打算做抑制性消减杂交，要用到巢式PCR，可以交流一下。
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生而不息，奋斗不止！
2楼2013-04-07 17:19:27
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gissingtan

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhangquan084 at 2013-04-07 17:19:27
最近正打算做抑制性消减杂交，要用到巢式PCR，可以交流一下。

好的~请问你知道巢式PCR具体操作过程吗？
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-07 17:33:20
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zhangquan084

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

不太清楚，最近也刚在学。只知道原理！
赞一下 回复此楼
生而不息，奋斗不止！
4楼2013-04-07 17:48:15
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