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gissingtan

新虫 (初入文坛)

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[求助] 求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help

最近在做巢式PCR，请问有经验的师兄师姐，你们第一次PCR的产物需要做什么处理才作为第二次PCR的模板？
我听师姐说直接切胶，放-20℃过夜，12000rpm离心10min，取上清液做模板，不知是否合理，我自己尝试了一下，跑胶检测没有条带。

我想请教：
1、第一次PCR产物是怎么处理，再作为第二次PCR的模板
2、我做的方法是否正确，如果正确，为什么检测没有条带
谢谢大家了

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1楼 2013-04-07 15:52:54

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sxxuan

金虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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gyesang: 回帖置顶 2013-04-27 21:15:47
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 21:15:57

如果条带单一，我都是直接取1ulPCR产物做下一轮的模板，看条带亮度，有时候是2ul
如果有杂带，就切胶回收再按上述方法进行。
你师姐说的方法，我也试过，不过是用大量的切胶，胶切碎了再加入TE，反复冻融离心取上清，回收率很低，过程中损失很多DNA，个人不建议，还不如直接割胶纯化。