24小时热门版块排行榜

返回列表

本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

gissingtan

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 148
帖子: 15
在线: 19.9小时
虫号: 2341070
注册: 2013-03-12
专业: 植物生理与生化

[求助] 求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help

最近在做巢式PCR，请问有经验的师兄师姐，你们第一次PCR的产物需要做什么处理才作为第二次PCR的模板？
我听师姐说直接切胶，放-20℃过夜，12000rpm离心10min，取上清液做模板，不知是否合理，我自己尝试了一下，跑胶检测没有条带。

我想请教：
1、第一次PCR产物是怎么处理，再作为第二次PCR的模板
2、我做的方法是否正确，如果正确，为什么检测没有条带
谢谢大家了

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2013-04-07 15:52:54

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)

MolEPI: 4
应助: 107 (高中生)
金币: 3442.4
散金: 104
红花: 17
帖子: 1478
在线: 266.1小时
虫号: 512865
注册: 2008-02-27
性别: MM
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gissingtan: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-09 11:28:52
gissingtan: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-04-10 17:44:08
gyesang: 回帖置顶 2013-04-27 21:15:47
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-04-27 21:15:57

如果条带单一，我都是直接取1ulPCR产物做下一轮的模板，看条带亮度，有时候是2ul
如果有杂带，就切胶回收再按上述方法进行。
你师姐说的方法，我也试过，不过是用大量的切胶，胶切碎了再加入TE，反复冻融离心取上清，回收率很低，过程中损失很多DNA，个人不建议，还不如直接割胶纯化。