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求助师兄师姐~有关于巢式PCR的问题~~help
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最近在做巢式PCR，请问有经验的师兄师姐，你们第一次PCR的产物需要做什么处理才作为第二次PCR的模板？ 我听师姐说直接切胶，放-20℃过夜，12000rpm离心10min，取上清液做模板，不知是否合理，我自己尝试了一下，跑胶检测没有条带。   我想请教： 1、第一次PCR产物是怎么处理，再作为第二次PCR的模板 2、我做的方法是否正确，如果正确，为什么检测没有条带 谢谢大家了  |
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sxxuan
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【答案】应助回帖
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如果条带单一，我都是直接取1ulPCR产物做下一轮的模板，看条带亮度，有时候是2ul 如果有杂带，就切胶回收再按上述方法进行。 你师姐说的方法，我也试过，不过是用大量的切胶，胶切碎了再加入TE，反复冻融离心取上清，回收率很低，过程中损失很多DNA，个人不建议，还不如直接割胶纯化。 |
11楼2013-04-09 09:07:37
zhangquan084
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2楼2013-04-07 17:19:27
3楼2013-04-07 17:33:20
zhangquan084
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4楼2013-04-07 17:48:15