应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 怎样相处蛋白之间相互作用却不改变蛋白活性？
51/1返回列表
查看: 1435  |  回复: 14
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

[交流] 怎样相处蛋白之间相互作用却不改变蛋白活性？

最近在纯化蛋白：
交代背景;
遇到一个问题就是杂蛋白与目的蛋白以某种方式（可能是疏水，也可能是共价键，也有可能是其他的作用方式）结合，导致纯化过程中杂蛋白始终伴随着目的蛋白。无论是过离子交换还是过分子筛，都是同样结果。
问题是;
有没有一种试剂或者缓冲液可以消除蛋白之间的相互作用，同时却不影响蛋白的活性？（目前已经在样品中加入了10mM DTT）
是否稀释蛋白，使浓度降低，可以缓解这种情况。

求高手解答！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-04-03 13:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

auroraA

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dshlove: 金币+3 2013-04-04 17:21:12
引用回帖:
8楼: Originally posted by dshlove at 2013-04-04 11:24:51
是大肠杆菌里表达的蛋白。
杂蛋白主要是70kDa还有35kDa，两条。
RIPA buffer是什么，能否告诉下配方？...

70kda的是heatshock,加点ATP就和你的蛋白分开了. 35的不知道是什么.如果比你的蛋白小,可能是降解产物,因为细菌里有点降解,或者纯化过程中的降解很普遍,这根据每个蛋白的性质而异.比如p35这个蛋白,想拿到50%"纯"的都难,因为多数都降解了. 如果比你的蛋白大,可能是多聚,或者降解加多聚,SDS也打不开,这也很普遍.
RIPA buffer的 配方记不得了,得去查.不过最重要的成分就是0.1%的SDS,其他的成分随便看着加吧,不外乎就是NaCl,Tris,detergent之类的.RIPA一般是做细胞的人用得多,缺点是SDS可能会插入你的蛋白,可能会影响蛋白活性或结合.但是这也因蛋白而异.需要自己试.
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2013-04-04 13:26:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

auroraA

铁虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dshlove: 金币+1 2013-04-04 11:25:01
是从细菌里提得吗? 杂蛋白是大约70kDa吗?
另外可以考虑RIPA buffer,但是因为含有少量的SDS,对目的蛋白的影响不太好说,但是值得一试
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-04-04 01:10:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wchuangqi

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dshlove: 金币+1 2013-04-04 11:24:56
加低浓度的detergent不知道可否
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-04-04 06:52:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hudazhangyi

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
dshlove: 金币+1 2013-04-04 11:21:47
不知道你有没有目的蛋白的抗体或买到抗体，做一下亲和层析
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-04-04 10:47:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 有没有学校收留 +3 蒋昌鹏qtj 2026-04-20 3/150 2026-04-22 20:25 by 学员JpLReM
[考研] 312求调剂 +3 山河似你温柔 2026-04-22 3/150 2026-04-22 20:17 by 学员JpLReM
[考博] 华师大读博 +3 xq83 2026-04-22 5/250 2026-04-22 10:42 by xq83
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +5 yexuqing 2026-04-19 5/250 2026-04-22 10:01 by easeheart
[论文投稿] 急需审稿人！！！ +3 陆小果画大饼 2026-04-21 3/150 2026-04-21 23:54 by jzy_123456
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 8/400 2026-04-21 16:26 by 啃面包的小书虫
[考研] 295分求调剂 +6 ?要上岸? 2026-04-17 6/300 2026-04-21 08:18 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 湖南大学刘巧玲课题组2026年第二批次博士研究生招生信息 +3 南风观火 2026-04-18 5/250 2026-04-20 10:13 by 南风观火
[考研] 294求调剂 +8 淡然654321 2026-04-17 9/450 2026-04-19 19:51 by Equinoxhua
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 接受任何调剂 +6 也就是栗子 2026-04-17 7/350 2026-04-18 17:20 by 涵竹刘
[考研] 收到复试调剂但是去不了 +8 小蜗牛* 2026-04-16 8/400 2026-04-18 11:15 by zixin2025
[考研] 260求调剂 +4 Zyt1314520.. 2026-04-17 5/250 2026-04-18 08:28 by babysonlkd
[有机交流] 二苯甲酮酸类衍生物 50+3 小白爱主人 2026-04-17 6/300 2026-04-17 18:47 by kf2781974
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭