24小时热门版块排行榜    

查看: 1225  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

xiaowoodworm

金虫 (正式写手)

[求助] PCR扩增 水稻未知基因 反转录

水稻 ,一段未知功能的序列 2.8K长 cDNA 用ACTIN检测 质量较好 引物 是头尾个20bp 加上酶切位点NHEI 和 BGLII和保护碱基 用的Takara的PRIMERSTAR GXL 和takara的普通酶 完全扩不出来  换成DNA 还是扩不出来 。请问各位大神是什么原因,解决方法?
     还有个问题 拉 某一段2.8K 已知cDNA的全长, 用一般的反转试剂盒是不是可以 还是一定要用RACE吗?求各位能给予帮助!谢谢啦!
    以下附图:
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaowoodworm

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-02 19:40:26
你这种情况,需要优化下引物,不一定要先加上酶切位点,你可以先将包含有你基因ORF的cDNA扩出来,构建到T载体等中间载体上,再设计引物扩CDS做表达或者其他用途,所以我的建议是重新设计引物,引物可以设计在你基因 ...

谢谢gyesang你,再请教下:1,可是这是一段未知功能的基因, NCBI上只有单纯的 CDS 没有UTR?2,CDNA的质量和这个有没有关系?
5楼2013-04-02 21:57:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

xiaowoodworm

金虫 (正式写手)

刚才不会上传图片,现附上图片。请各位师兄师姐帮帮忙!

333.jpg

2楼2013-04-02 16:23:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaowoodworm

金虫 (正式写手)

刚才稍调整了下图片。现在再次上传图片。

333.jpg

3楼2013-04-02 16:29:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaowoodworm(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,鼓励应助,分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-11 08:22:09
你这种情况,需要优化下引物,不一定要先加上酶切位点,你可以先将包含有你基因ORF的cDNA扩出来,构建到T载体等中间载体上,再设计引物扩CDS做表达或者其他用途,所以我的建议是重新设计引物,引物可以设计在你基因的5‘和3’UTR里面
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
4楼2013-04-02 19:40:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 导师吐槽:我怎么摊上了这么个极品研究生! +8 苏东坡二世 2026-08-23 8/400 2026-08-28 14:41 by lkforward
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见(F口面上) +4 gdd2018 2026-08-28 9/450 2026-08-28 14:22 by jklily
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +12 晴天加油 2026-08-26 13/650 2026-08-28 11:32 by skyjudy
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 看板上这么多中的,有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了,中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
信息提示
请填处理意见