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xiaowoodworm

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[求助] PCR扩增水稻未知基因反转录

水稻，一段未知功能的序列 2.8K长 cDNA 用ACTIN检测质量较好引物是头尾个20bp 加上酶切位点NHEI 和 BGLII和保护碱基用的Takara的PRIMERSTAR GXL 和takara的普通酶完全扩不出来换成DNA 还是扩不出来

。请问各位大神是什么原因，解决方法？
还有个问题拉某一段2.8K 已知cDNA的全长, 用一般的反转试剂盒是不是可以还是一定要用RACE吗？求各位能给予帮助！谢谢啦！

以下附图：

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1楼2013-04-01 19:26:06

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xiaowoodworm

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引用回帖:

4楼: Originally posted by gyesang at 2013-04-02 19:40:26
你这种情况，需要优化下引物，不一定要先加上酶切位点，你可以先将包含有你基因ORF的cDNA扩出来，构建到T载体等中间载体上，再设计引物扩CDS做表达或者其他用途，所以我的建议是重新设计引物，引物可以设计在你基因 ...

谢谢gyesang你,再请教下：1，可是这是一段未知功能的基因， NCBI上只有单纯的 CDS 没有UTR？2，CDNA的质量和这个有没有关系？