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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 纳米生物材料 » 蛋白上连抗体和PEG
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ycy66ds

铁虫 (小有名气)

[求助] 蛋白上连抗体和PEG

大家好！我想在一个蛋白上连PEG使它能溶于石油（有机溶剂）又溶于水，同时还要连一个抗体，请问：
1、我是在连完PEG后在PEG上连抗体呢？还是把PEG和抗体都连在蛋白上呢？
2、如果在PEG上连抗体会不会就失去了PEG的作用了，就不能溶于石油了？
3、如果都连在蛋白上的话，我用蛋白羧基与PEG相连，蛋白氨基与抗体相连，这个方案可行吗？需要注意什么？
刚刚入门，什么都不懂，希望各位大侠不吝指点！
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1楼2013-04-01 11:41:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

silentwind87

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
fool_proof: 金币+1, 欢迎来生物材料板块应助交流 2013-04-02 11:41:53
ycy66ds: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-04-15 08:46:10
EDC/NHS是用来活化羧基的，形成中间体酯然后与氨基反应形成酰胺，需要注意的就是活化阶段和酰胺化阶段的体系pH，我记得貌似活化阶段是pH5.5反应活性最高，然后调至中性进行酰胺化。具体你可以搜一下NHS和EDC的产品说明，Thermo公司的，百度文库里就有，里面会给你一些参考。然后我想可能你需要注意的是你做这个东西的目的是什么，抗体偶联了以后是否因为占用了相应基团而失去活性？
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8楼2013-04-02 09:45:56
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leisure797

铁杆木虫 (职业作家)

百里登风

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
fool_proof: 金币+1, 感谢回帖应助，欢迎常来生物材料版交流 2013-04-01 12:55:51
阿拉不晓得，不过建议你去知网空间里查查相关中文文献，然后确定大致方向后，再查ISI英文文献，多和业内学着交流，可发邮件或者打电话，在文献里都有联系方式的哦
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笑一个！
2楼2013-04-01 11:58:58
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ycy66ds

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by leisure797 at 2013-04-01 11:58:58
阿拉不晓得，不过建议你去知网空间里查查相关中文文献，然后确定大致方向后，再查ISI英文文献，多和业内学着交流，可发邮件或者打电话，在文献里都有联系方式的哦

O(∩_∩)O谢谢，已经查了半年文献了，大致确定这么个方向，但是关于连PEG后再连抗体的文献太少了，不知您是否有推荐的合适文章，感谢！
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3楼2013-04-01 12:02:18
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DigitalPig

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-01 14:09:09
蛋白和PEG反应方法很多都是通过NHS (N-hydroxysuccinimide)+EDC (ethyl(dimethylaminopropyl) carbodiimide)来做的，利用蛋白的amine和PEG的COOH反应。或者你可以直接去买NHS封端的PEG
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4楼2013-04-01 14:06:11
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ycy66ds

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by DigitalPig at 2013-04-01 14:06:11
蛋白和PEG反应方法很多都是通过NHS (N-hydroxysuccinimide)+EDC (ethyl(dimethylaminopropyl) carbodiimide)来做的，利用蛋白的amine和PEG的COOH反应。或者你可以直接去买NHS封端的PEG

嗯嗯，我准备用NH2-PEG与蛋白的COOH相连（NHS/EDC），这个反应是要在有机溶剂里反应吗？水里或者缓冲液中能反应吗？
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5楼2013-04-01 14:18:03
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DigitalPig

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
fool_proof: 金币+1, 感谢回帖应助，欢迎常来生物材料版交流 2013-04-01 18:26:18
引用回帖:
5楼: Originally posted by ycy66ds at 2013-04-01 01:18:03
嗯嗯，我准备用NH2-PEG与蛋白的COOH相连（NHS/EDC），这个反应是要在有机溶剂里反应吗？水里或者缓冲液中能反应吗？...

NHS/EDC 是水相的。如果你想做有机相需要用DCC做催化剂。
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6楼2013-04-01 14:20:22
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ycy66ds

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by DigitalPig at 2013-04-01 14:20:22
NHS/EDC 是水相的。如果你想做有机相需要用DCC做催化剂。...

好的，知道了，O(∩_∩)O谢谢~这个反应需要注意什么吗？比如投料的先后什么的？
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7楼2013-04-01 20:41:10
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scncwxy

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
黄酮: 金币+1, 谢谢回帖交流 2013-04-15 08:47:00
ycy66ds: 金币+2, ★有帮助 2013-04-15 09:39:08
1、蛋白大多是溶于水的，PEG是亲水性很强的聚合物，你这样连接后我不认为其能溶于极性小有机溶剂
2、不清楚你蛋白修饰抗体的目的是什么，若是为蛋白提供靶向能力，与特定受体的细胞相互作用的话建议用双功能性的PEG，一端连接蛋白，另一端连接抗体，要保证抗体处于PEG的最外端。
3、PEG的亲水性主要是中间的亲水性长链决定的，两端如果不是接非常疏水的物质的话其整体的亲水性改变不大。
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9楼2013-04-02 18:29:38
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ycy66ds

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by scncwxy at 2013-04-02 18:29:38
1、蛋白大多是溶于水的，PEG是亲水性很强的聚合物，你这样连接后我不认为其能溶于极性小有机溶剂
2、不清楚你蛋白修饰抗体的目的是什么，若是为蛋白提供靶向能力，与特定受体的细胞相互作用的话建议用双功能性的PE ...

谢谢！PEG是两亲聚合物，有文献报道修饰后的protein可以溶于有机溶剂。
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10楼2013-04-15 08:45:33
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