24小时热门版块排行榜    

查看: 987  |  回复: 6
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

1338070201

新虫 (初入文坛)

[求助] 真核转染表达,求助

各位大神,我将我的蛋白克隆到一个带有puro抗性的真核质粒上,想筛选稳转。但是可能是我蛋白带有核酸内切酶活性的缘故,瞬时转染在293T细胞中都不表达。我想问问有什么解决方法,换质粒行吗?有哪些质粒可供选择?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

一切成功来源于脚踏实地
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

想要构建稳定细胞系,这种情况的话,应该确定质粒有没有转进去,楼上说的对的,其次在考虑转染效率
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
6楼2015-11-09 17:08:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

nlbtr

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1338070201: 金币+5, 有帮助 2013-04-02 15:37:44
即便有核酸内切酶活性,瞬时表达后,也应该能拿到目的蛋白啊。
2楼2013-04-01 12:02:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1338070201

新虫 (初入文坛)

应该就是不表达啊,western和免疫荧光检测不到,puro筛选稳转全部死光,真的让我很死机啊
一切成功来源于脚踏实地
3楼2013-04-01 15:21:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

here0009

银虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
1338070201: 金币+25, ★★★很有帮助 2013-04-02 15:37:26
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-05-31 18:08:49
你把内切酶活性的关键位点突变掉看下是否可以表达,如果可以,则说明是内切酶活性而非载体的原因。可能再换载体也没什么用了。不过你最好还是一些参考内切酶表达的文献看看吧,
Forthemoon
4楼2013-04-02 15:28:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0805总分292,求调剂 +7 幻想之殇 2026-03-01 7/350 2026-03-01 21:22 by 公瑾逍遥
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +5 礼堂丁真258 2026-02-28 7/350 2026-03-01 19:12 by Js512888
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:11 by 海嵙Y
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[基金申请] 刚录用,没有期刊号,但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:19 by Ducount.Y
[考研] 材料284求调剂,一志愿郑州大学英一数二专硕 +10 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 10/500 2026-03-01 14:12 by yc258
[考研] 302材料工程求调剂 +4 Doleres 2026-03-01 5/250 2026-03-01 11:52 by liqiongjy
[考研] 寻找调剂 +4 LYidhsjabdj 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:56 by sunny81
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧? +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
信息提示
请填处理意见